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上海卓立生物科技有限公司
數字PCR技術服務

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產品名稱: 數字PCR技術服務

英文名稱: Digital PCR (dPCR)

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技術原理:
數字PCR( 也可稱單分子PCR)包括兩部分內容:PCR 擴增和熒光信號分析。在PCR擴增階段,與傳統技術不同,數字PCR需要將樣品稀釋到單分子水平,并平均分配到幾十至幾萬個單元中進行反應。不同于qPCR對每個循環進行實時熒光測定的方法,數字PCR技術是在擴增結束后對每個反應單元的熒光信號進行采集。最后通過直接計數或泊松分布公式計算得到樣品的原始濃度或含量。數字PCR的定量方法不依賴于擴增曲線的循環閾值,因此不受擴增效率的影響,也不必采用看家基因和標準曲線,具有很好的準確度和重現性,可以實現絕對定量分析。在未來十年內,醫學保健的目標是提供優質高效的個性化醫療。PCR方法會在實現這個目標的過程中發揮重要作用。相比于傳統的PCR,數字PCR 技術有著無可比擬的優勢和廣泛的應用前景。
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數字PCR檢測原理

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數字PCR檢測流程
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應用領域:
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  • 突變/稀有變異檢測(Mutation/Rare variant detection)
  • 拷貝數變異(Copy-number variation)
  • 進入外周循環(包括血液和糞便)的腫瘤組織核酸分析
  • 無創產前篩查:
  • 轉化移植檢測。
  • 藥理學(Pharmacogenetics)
  • 基因表達分析(Gene expression analysis)-特別針對單細胞或少量細胞或者血清血漿樣品
  • 線粒體拷貝數分析與線粒體突變分析
  • 數字PCR可以驗證二代測序(NGS)
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應用案例:
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  • Huggett JF, Foy CA, Benes V et al.(2013) The digital MIQE guidelines: minimum information for publication of quantitative digital PCR experiments. Clinical Chem 6:892–902.
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  • Absolute quantification by droplet digital PCRversus analog real-time PCR Christopher M Hindson et al. nature methods | VOL.10 NO.10 | OCTOBER 2013
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  • Detection of Cancer DNA in Plasma of Early Stage Breast Cancer Patients Julia A. Beaver*1, Danijela Jelovac February 19, 2014 American Association for Cancer Research
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  • Qin J, Jones R C, Ramakrishnan R. Studying copy number variations using a nanofluidic platform. Nucleic Acids Res, 2008,36(18): e116
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  • Lo Y M D, Fiona M F, Chan K C A, et al. Digital PCR for the molecular detection of fetal chromosomal aneuploidy. Proc Natl Acad Sci USA, 2007, 104(32): 13116-13121
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  • Warren L, David B, Irving L W, et al. Transcription factor profiling in individual hematopoietic progenitors by digital RT-PCR. Proc Natl Acad Sci USA, 2006, 103(47): 17807-17812
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  • Ottesen E A, Jong W H, Stephen R Q, et al. Microfluidic digital PCR enables multigene analysis of individual environmental bacteria. Science, 2006, 314(5804): 1464-1467
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  • Tadmor A D, Elizabeth A O, Jared R L, et al. Probing individual environmental bacteria for viruses by using microfluidic digital PCR. Science, 2011, 333(6038): 58-62
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  • Tian Wang, Hongying Sha. , et al. Polar Body Genome Transfer for Preventing the Transmission of Inherited Mitochondrial Diseases。Cell 157, 1591–1604, June 19, 2014