?——即蛋白質藥物的二硫鍵配對分析技術服務

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二硫鍵是重要的蛋白質翻譯后修飾形式，也是一種比較特殊的修飾。蛋白質通過各種鏈間和鏈內的半胱氨酸連接在一起，對蛋白質分子保持正確的高級結構，維持必要的生物活性至關重要。因此在蛋白質類藥物的生物化學分析中，二硫鍵一直是關心的重點。

利用質譜分析二硫鍵，以前由于二硫鍵多肽分子的二級質譜圖非常復雜，質譜分析需要大量人工進行，費時費力且不能準確有效。而現代生物質譜學在最近十年發展非常迅速，大為提高了對蛋白質分子的定性定量和翻譯后修飾的分析能力。

APT結合蛋白質溶液內的非還原酶解和LC-MS/MS，對供試品的二硫鍵配對方式進行分析，明確供試品的各種鏈內和鏈間二硫鍵配對方式，并提供確定這些二硫鍵配對方式的實驗證據，包括一級和二級質譜數據等。

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“蛋白質類藥物的二硫鍵配對組成是非常重要的理化性質”

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技術指標

本方法所檢測的樣品是蛋白質或多肽類供試品，測量的是二硫鍵所在多肽分子的分子量，測定的是該多肽分子的氨基酸序列和二硫鍵配對方式。蛋白質或者多肽供試品既可以是固體樣品，也可以是溶液樣品，供試品量不應少于200μg。供試品如果為固體，應為蛋白質多肽凍干制品；如果為液體，樣品中蛋白質多肽濃度應盡可能在2mg/ml以上。

本方法檢測是二硫鍵配對方式和其所在多肽分子的氨基酸序列。二硫鍵所在多肽分子的分子量與理論值相差小于2 Da，其二級碎片分子量與理論值相差小于0.8 Da。對還原前后的二硫鍵所在多肽分子做色譜質譜圖分析（XICs），其信號峰面積需有顯著差異。

二硫鍵測定方法所使用的儀器是，Thermo公司和GE公司生產的高校液相串聯質譜儀LTQ-Velos質譜儀和Ettan MDLC色譜系統。

案例分析

下圖顯示一個還原前后的蛋白質藥物的二硫鍵分析圖譜（XIC of LC-MS/MS）。

圖為還原前后的蛋白質藥物的二硫鍵分析圖譜（XIC of LC-MS/MS）

下圖為蛋白質類供試品二硫鍵組成分析的MS/MS圖譜。

圖為蛋白質類供試品二硫鍵組成分析的MS/MS圖譜

Q&A

1)?????簡單介紹一下二硫鍵組成分析的實驗參數。