rTEV protease
產品名稱： rTEV protease
英文名稱： 重組型TEV蛋白酶
產品編號： FrdE0014
產品價格： null
產品產地： 中國
品牌商標： Frdbio
更新時間： 2025-09-24T15:52:19
使用范圍： 僅供科研使用
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rTEV protease 產品說明書
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產品編號 |
產品名稱 |
規格 |
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FrdE0014 |
rTEV protease |
500U/1000U/10KU |
保存條件：-20℃，一年有效。
1.產品簡介：
重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經過基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內表現出更強的穩定性和特異性。rTEV是一種用來切除融合蛋白上親和標簽的常用工具酶，具有很強的位點特異性，嚴格識別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。普遍應用的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30℃時可達到最佳活性，但在pH 6.0-8.5和溫度4-30℃的廣泛范圍內皆有活性（見表1），使得反應條件的選擇可根據目的蛋白的情況而靈活變動。另外rTEV切割后也能利用其N端的6×His標簽，通過Ni-NTA樹脂去除，以達到純化目的蛋白的目的。
2.產品來源：
大腸桿菌表達
3.純度：
經SDS-PAGE及HPLC分析，純度> 95%
4.緩沖液組分：
50 mM Tris，pH 8.0，0.5 mM EDTA，1 mM DTT
5.比活性：
5U/ul
6.酶活定義：
在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH 8.0，0.5 mM EDTA，1 mM DTT）中，30℃反應1 h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定義為一個活性單位。
7.使用方法：
1）.取適量rTEV Buffer 2（1000×）作10倍稀釋至rTEV Buffer 2（100×）。
2）.在EP管中配制如下反應體系。
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組分 |
用量 |
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融合蛋白 |
20 μg |
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rTEV Protease (5 U/μL) |
2-4 μL |
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rTEV buffer 1（20×） |
7.5 μL |
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rTEV Buffer 2（100×）a |
1.5 μL |
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DDW（超純水） |
up to 150 μL |
3）.30℃孵育，在1、2、4、6小時分別吸出30 μL上述反應液，置于單獨的EP管中。
4）.向上述EP管中加入30 μL 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。
5）.樣品全部反應完畢后，樣品煮沸5 min，取40 μL進行SDS-PAGE分析。確定最佳反應時間。如融合蛋白要求低溫處理，可將反應液置于4℃，延長反應時間，并增加rTEV酶用量，以保證酶切效果。
注意事項
1）.影響天然TEV酶活性的常見因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/mL），EDTA（1 mM），Pestatin A（1 mM）以及E-64（3 mg/mL），而rTEV可兼容上述抑制劑；2）Zn離子濃度（>5 mM），同樣對rTEV活性有抑制；3）與半胱氨酸反應的試劑，也是rTEV的潛在抑制劑。
2）.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
*本試劑僅供實驗室研究使用