TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒AP顯色系統-常用生化試劑-試劑-生物在線
北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司
TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒AP顯色系統

TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒AP顯色系統

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產品名稱: TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒AP顯色系統

英文名稱: no

產品編號: TUNEL-A2

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產品產地: 北京

品牌商標: 鼎國

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TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒

AP檢測系統)

一、???????????? 概述

TUNEL技術是分子生物學與形態學相結合的研究方法,對完整的單個凋亡細胞核或凋亡小體進行原位染色,能準確的反映細胞凋亡最典型的生物化學和形態特征,其靈敏度遠比一般的組織化學和生物化學測定法要高,因而在細胞凋亡的研究中已被廣泛采用。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟或冰凍切片)和細胞樣本(細胞爬片)的凋亡原位檢測。

產品名稱

顯色系統

產品編號

TUNEL細胞凋亡原位檢測試劑盒

AP顯色系統

TUNEL-A2

二、試劑盒組成

組分

25 assays

蛋白酶K溶液

1ml

阻斷劑

1ml

標記溶液

450μl

脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT

50μl

封閉液

1ml

AP-SP

1ml

20XSSC

10ml

三、自備試劑及用品

a)???????? 淋洗緩沖液(鼎國生物:PBS磷酸鹽緩沖液系列BF-0011/0012/0013/0014

b)??????? 復染劑(鼎國生物:AR-0711/0712/0721/0722/0771/0772

c)???????? 封片劑(鼎國生物:AR-0811

d)??????? 孵育盒(鼎國生物:AR-0951/0952

e)???????? 定時器(鼎國生物:AR-0961/0962

f)???????? 顯微鏡

g)??????? BCIP/NBT顯色劑(鼎國生物:AR-0631/0632/0633

h)??????? 核固紅(鼎國生物:AR-0771/0772

四、不同類型標本的處理方法:

實驗用玻片:清洗干凈,用多聚賴氨酸或APES進行防脫處理。

細胞爬片

固定液:4% 多聚甲醛(pH7.4 PBS溶液配制)室溫固定30min。0.01M PBS3次,5min/。

滲透液:0.1% Triton X-100溶于1XSSC溶液)冰浴2-10min。

石蠟組織切片

二甲苯和梯度乙醇100%95%、75%50%,常規脫蠟入水。

1020ug/ml K 37 ?530min(可根據標本新舊厚薄調整消化時間)。

冰凍組織切片

固定液:4% 多聚甲醛(pH7.4 PBS溶液配制)室溫固定30min0.01M PBS3次,5min/

滲透液:0.1% Triton X-100溶于1XSSC溶液)冰浴2-10min。

五、標本處理后的操作

1.? 0.01M PBS2×5min,除去PBS液,加入阻斷劑,暗盒中室溫孵育10min

2.? 0.01M PBS2×5min。

3.? 制備TUNEL反應混合液:處理組用TdT酶和標記溶液體積比19混合;陰性對照不加酶,以去離子水代替。

4.? 除去PBS液,加TUNEL反應混合液于標本上,暗盒中37孵育1-2h

5.? 浸入2XSSC15min終止反應。

6.? 0.01M PBS5min,除去PBS液,滴加封閉液,37孵育10min。不洗,棄封閉液。

7.? 滴加AP-SP,37孵育30min。

8.? 0.01M PBS3×5min,除去PBS液,每片滴加50μl BCIP/NBT顯色工作液,置于避光濕盒中顯5-30min。顯微鏡下觀察無背景出現可繼續顯色。

9.? BCIP/NBT 染色后,自來水沖洗,核固紅復染。

10. 復染后,蒸餾水洗,脫水,透明,封片。

結果觀察:顯微鏡下觀察細胞核有藍紫色或藍黑色顆粒者為陽性。

六、保存和有效期:

?? -20保存, 1年有效。

為了您的安全和健康,請穿戴實驗服和手套操作!

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