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過氧化氫酶（Catalase，CAT）試劑盒說明書
測定意義：
CAT 是最主要的H2O2 清除酶，在活性氧清除系統中具有重要作用。
測定原理：
H2O2 在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能夠分解H2O2，使反應溶液240nm 下的吸光度隨反
應時間而下降，根據吸光度的變化率可計算出CAT 活性。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：100 uL×3 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備
收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每200 萬細菌或細胞加入400μL 提取
液的比例充分勻漿以破碎并裂解細胞；8000g4℃離心10 分鐘，取上清，置冰上待測。
稱取約0.1g 組織，加入1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10 分鐘，取上清，置
冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、CAT 檢測工作液的配制：用時在每瓶試劑二（100 uL）中加入20mL 試劑一，充分混勻，
作為工作液。
2、測定前將CAT 檢測工作液室溫放置，使之溫度不低于室溫。
3、取1mLCAT 檢測工作液于1mL 石英比色皿中，再加入35μL 粗酶液，混勻；室溫下立即
測定240nm 下的初始吸光值A1 和1min 后的吸光值A2。
CAT 活性計算：
1、血清（漿）CAT 活力的計算:
單位的定義：每升血清（漿）在反應體系中每分鐘催化1umol H2O2 降解定義為一個酶活力
單位。
CAT（U/L）＝750×（A1－A2）
2、組織CAT 活力計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力
單位。
CAT（U/mg prot）＝750×（A1－A2）÷蛋白質濃度（mg/mL）
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g 組織在反應體系中每分鐘催化1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
CAT（U/g mass）＝750×（A1－A2）÷樣品質量（g/L）
3、細菌或細胞中CAT 活力計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：PH7.0 條件下，每mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化1nmol H2O2 降解定義
為一個酶活力單位。
CAT（U/mg prot）＝750×（A1－A2）÷蛋白質濃度（mg/mL）
3.2 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘催化1nmol H2O2 降解定義為一個酶
活力單位。
CAT（U/104 cell）＝750×（A1－A2）÷細胞密度（104 cell /mL）

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