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• 別名：B82

  背景：B82(小鼠皮膚成纖維細胞（對BrdU耐藥）)在BUdR中通過漸進選擇獲得NCTC克隆929（ECACC目錄號88102702）的衍生物，克隆效率為70-80%。

  種類：小鼠

  組織：脂肪

  疾病：小鼠C3H/An乳暈和脂肪組織

  形態：成纖維細胞

  生長方式：粘著

  倍增時間：不適用

  DNA檔案：科比耶的細胞系認證服務

  培養基：MEM+10%FBS+1%NEAA+1%NaP

  我們強烈建議完全的培養基。

  凍存介質：90%FBS+10%DMSO

  核型：2n=51

  繼代培養常規：分次融合培養（70-80%）1:3至1:6，即使用0.25%胰蛋白酶/EDTA、5%CO2、37°C以2-4x1000個細胞/cm2接種

  細胞收到后處理：
  細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿完全培養液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養液收集至離心管中，加入6ml完全培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松）
  細胞培養步驟：
  1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
  2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
  1、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
  1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
  2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。
  3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
  4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6?ml培養液的新皿中或者瓶中。
  PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右完全培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
  
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