E-PNG01  糖基肽酶（N糖苷肽酶F）

PNG酶F適用于從糖蛋白和糖肽中釋放所有類型（高甘露糖型、雜合型和復雜型）的N - 連接糖基。PNG酶F不會去除植物糖蛋白上常見的含有α(1 - 3)連接核心巖藻糖的低聚糖。

PNG酶F從糖蛋白中切割N - 連接（天冬酰胺連接）低聚糖。該酶將天冬酰胺脫氨為天冬氨酸，同時保持低聚糖的完整性。變性作用可提高切割速率。大多數天然蛋白仍能夠被完全N - 去糖基化，但孵育時間必須延長。在反應條件（37°C）下，該酶至少96小時內將保持完全活性。PNG酶F不會去除植物糖蛋白上常見的含有α-(1,3)-連接核心巖藻糖的低聚糖；為此目的，請使用肽N - 糖苷酶A。

產品規格：

PNG酶F可從糖蛋白上切割N - 連接（天冬酰胺連接）寡糖。該酶將天冬酰胺脫氨為天冬氨酸，同時保持寡糖的完整性。PNG酶F不會去除植物糖蛋白上常見的含有α-(1,3)連接核心巖藻糖的寡糖；若要去除此類寡糖，請使用肽N - 糖苷酶A。

變性作用可提高切割速率。大多數天然蛋白仍能夠被完全N - 去糖基化，但可能需要延長孵育時間。在反應條件（37°C）下，該酶至少96小時內將保持完全活性。

有多種替代酶可用于去除N - 糖基，尤其是內切糖苷酶F家族酶和內切糖苷酶H。這些酶在寡糖核心的兩個N - 乙酰葡萄糖胺殘基之間進行切割，在天冬酰胺上保留一個N - 乙酰葡萄糖胺殘基，從而生成一個截短的糖分子。這會產生一種帶電糖，有助于使那些在使用PNG酶F（其會完整去除寡糖）去糖基化后會沉淀的蛋白質保持在溶液中。內切糖苷酶F1可切割高甘露糖型和部分雜合型N - 糖基。內切糖苷酶F2可切割雙天線型和部分高甘露糖型N - 糖基（切割速率為內切糖苷酶F1的1/40）。內切糖苷酶F3可釋放三天線型和巖藻糖基化雙天線型N - 糖基。內切糖苷酶H可去除雜合型或高甘露糖型糖基。

來源：伊麗莎白金菌（原屬腦膜炎敗血黃桿菌）

EC編號：3.5.1.52

PDB編號：1PGS

UniProt編號：Q9XBM8

其他名稱：PNG酶F、肽N - 糖苷酶F、N - 糖苷酶、N - 糖基酶

E - PNG01產品包含：

PNG酶F溶于20 mM Tris - HCl緩沖液（pH 7.5）中，體積為60 µL

5倍反應緩沖液：7.5 – 250 mM磷酸鈉緩沖液，pH 7.5

變性溶液：2% SDS，1 M β - 巰基乙醇

Triton X - 100溶液：15%

E - PNG01 - 200（僅含酶）產品內容：

PNG酶F溶于20 mM Tris - HCl緩沖液（pH 7.5）中，體積為200 µL

比活性：>25 U/mg

活性：5 U/mL

分子量：36,000道爾頓

pH范圍：6 - 10，最適pH為7.5

操作流程：

1. 向一個Eppendorf管中加入最多200 µg的糖蛋白。用去離子水調整總體積至35 µL。

2. 加入10 µL 5倍反應緩沖液和2.5 µL變性溶液。在100°C下加熱5分鐘。

3. 冷卻。加入2.5 µL Triton X - 100并混合均勻。

4. 向反應體系中加入2.0 µL酶，在37°C下孵育3小時。

特異性：除非核心巖藻糖為α(1 - 3)連接，否則可切割所有天冬酰胺連接的復雜型、雜合型或高甘露糖型寡糖；天冬酰胺必須在兩端均為肽鍵連接，且無內切糖苷酶F干擾。

比活性定義：在37°C、pH 7.5條件下，催化從1微摩爾變性核糖核酸酶B上釋放N - 連接寡糖所需的酶量（通過SDS - PAGE檢測，切割后的核糖核酸酶B遷移速度更快）。

儲存條件：4°C保存酶。

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