內毒素清除劑

貨號：E1040 
規格：20ml/ 100ml 
保存：4℃半年有效，-20℃長期儲存。 
產品簡介： 本公司生產的內毒素清除劑主要用于清除 DNA、蛋白質或其他液體樣品中的內毒素。在特定的 pH 值、 鹽濃度和溫度條件下，內毒素清除劑能與 DNA、重組蛋白以及液體樣品中的內毒素特異性結合，經過室溫高 速離心后，DNA 或蛋白質等保留在水相，而內毒素則被濃縮到極小體積的下層相而被清除。經過 3 次以上重 復抽提后可將活性為 5000～50000 EU/ml 的內毒素水平降低到 5～0.5 EU/ml 以下，即降低 1000～10000 倍。 
操作步驟：?提取前請將內毒素清除劑放在冰上冰浴 5min，期間翻轉瓶子數次使試劑均勻預冷。 
1、a)已純化的質粒 DNA 內毒素清除：吸取 500μl DNA 溶液于微型離心管，加入 1/10 體積 3M NaAc pH5.2 或 1/20 體積 5M NaCl 溶液，冰浴 5min。 b)在提取質粒 DNA 過程中清除內毒素：以堿裂解法提取質粒為例，在加入裂解液和中和液并離心去除 碎片之后，吸取含質粒 DNA 的上清于新離心管中，冰浴 5min。 
2、加入 1/5 體積預冷的內毒素清除劑，振蕩混勻，溶液變渾濁。 
3、冰浴 5min，溶液應變清亮。 
4、37℃水浴 5min，不時振蕩，溶液又變渾濁。 
5、12000rpm 室溫離心 5min，溶液應分為兩相，上層水相含 DNA，下層油狀相含內毒素。 
6、將含 DNA 的上層水相轉移到新管，棄油狀相，重復抽提三次，即重復步驟 2-6 三次。 
7、加入 2.5 體積無水乙醇，-20℃沉淀 30min 或過夜；12000rpm 離心 10min，棄上清；加入 70％乙醇洗 滌沉淀，12000rpm 離心 5min 棄上清；空氣干燥沉淀，加入 100～200μl 無內毒素的高純水或 TE 溶解沉淀。 
8、用內毒素檢測試劑測定樣品中內毒素活性，并與初始樣品比較。 
注意事項： 
1、DNA 濃度>1mg/ml 時清除內毒素效率降低。由于 DNA 和蛋白質本身的性質，清除程序可導致 10-20 ％的 DNA 丟失，所幸的是與清除內毒素的艱難相比 DNA 更容易提取制備。 
2、所有溶液應用無內毒素的高純水配制，所有器械材料均應不含內毒素，玻璃器皿可高溫烘烤，非揮發 性水溶液可高壓 120℃高溫處理。 
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