技術(shù)簡(jiǎn)介：
常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（永久轉(zhuǎn)染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測(cè)。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體（episome）存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過一些選擇性標(biāo)記，如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復(fù)篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。
???轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大，許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例，細(xì)胞數(shù)量，培養(yǎng)及檢測(cè)時(shí)間等。
技術(shù)服務(wù)：
磷酸鈣轉(zhuǎn)染
磷酸鈣沉淀法是基于磷酸鈣DNA復(fù)合物的一種將DNA導(dǎo)入真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法，磷酸鈣被認(rèn)為有利于促進(jìn)外源DNA與靶細(xì)胞表面的結(jié)合。磷酸鈣-DNA復(fù)合物粘附到細(xì)胞膜并通過胞飲作用進(jìn)入靶細(xì)胞，被轉(zhuǎn)染的DNA可以整合到靶細(xì)胞的染色體中從而產(chǎn)生有不同基因型和表型的穩(wěn)定克隆。這種方法首先由Graham和van der Ebb使用，后由Wigler修改而成。可廣泛用于轉(zhuǎn)染許多不同類型的細(xì)胞，不但適用于短暫表達(dá)，也可生成穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
該法不適用于原代細(xì)胞（所需的DNA濃度較高），操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差。在實(shí)驗(yàn)中使用的每種試劑都必須小心校準(zhǔn)，保證質(zhì)量，甚至偏離最優(yōu)條件十分之一個(gè)pH都可能導(dǎo)致磷酸鈣轉(zhuǎn)染的失敗。而且對(duì)于有些細(xì)胞不適用。
脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
脂質(zhì)體為人工膜泡，可作為體內(nèi)，體外物質(zhì)轉(zhuǎn)送載體。將需轉(zhuǎn)移的DNA或RNA包裹于質(zhì)脂體，由于質(zhì)脂體具有磷脂雙層與胞膜相似，因此，可與細(xì)胞膜融合，將DNA轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞。
影響轉(zhuǎn)染效率差異的主要原因是細(xì)胞系間個(gè)體的差異，有的細(xì)胞系細(xì)胞膜通透性較好，質(zhì)脂體復(fù)合物較容易進(jìn)入細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率就高。又有的細(xì)胞系本生就不容易被轉(zhuǎn)染。其次脂類與DNA形成易于轉(zhuǎn)染結(jié)構(gòu)的特性存在負(fù)面效應(yīng)。其中主要的問題是毒性，表現(xiàn)為細(xì)胞聚集在一起，從壁上脫落。另為脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染易于受到血清中的脂肪與脂蛋白以及細(xì)胞外基質(zhì)中帶店成分，如硫酸軟骨素等干擾引起細(xì)胞死亡從而影響轉(zhuǎn)染效率。
客戶方需提供：
1．生長(zhǎng)狀況良好的宿主細(xì)胞株，一并提供細(xì)胞特性，培養(yǎng)條件及相關(guān)注意事項(xiàng)。
2．我們也可以為客戶代為購(gòu)買細(xì)胞并且提供凍存保種服務(wù)，客戶需要隨時(shí)郵寄。
3．提供質(zhì)粒，并說明質(zhì)粒大小，濃度，抗性，拷貝數(shù)等相關(guān)背景資料。
常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（永久轉(zhuǎn)染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù)，產(chǎn)生高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測(cè)。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體（episome）存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過一些選擇性標(biāo)記，如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復(fù)篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。
???轉(zhuǎn)染技術(shù)的選擇對(duì)轉(zhuǎn)染結(jié)果影響也很大，許多轉(zhuǎn)染方法需要優(yōu)化DNA與轉(zhuǎn)染試劑比例，細(xì)胞數(shù)量，培養(yǎng)及檢測(cè)時(shí)間等。
技術(shù)服務(wù)：
磷酸鈣轉(zhuǎn)染
磷酸鈣沉淀法是基于磷酸鈣DNA復(fù)合物的一種將DNA導(dǎo)入真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染方法，磷酸鈣被認(rèn)為有利于促進(jìn)外源DNA與靶細(xì)胞表面的結(jié)合。磷酸鈣-DNA復(fù)合物粘附到細(xì)胞膜并通過胞飲作用進(jìn)入靶細(xì)胞，被轉(zhuǎn)染的DNA可以整合到靶細(xì)胞的染色體中從而產(chǎn)生有不同基因型和表型的穩(wěn)定克隆。這種方法首先由Graham和van der Ebb使用，后由Wigler修改而成。可廣泛用于轉(zhuǎn)染許多不同類型的細(xì)胞，不但適用于短暫表達(dá)，也可生成穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。
該法不適用于原代細(xì)胞（所需的DNA濃度較高），操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差。在實(shí)驗(yàn)中使用的每種試劑都必須小心校準(zhǔn)，保證質(zhì)量，甚至偏離最優(yōu)條件十分之一個(gè)pH都可能導(dǎo)致磷酸鈣轉(zhuǎn)染的失敗。而且對(duì)于有些細(xì)胞不適用。
脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染
脂質(zhì)體為人工膜泡，可作為體內(nèi)，體外物質(zhì)轉(zhuǎn)送載體。將需轉(zhuǎn)移的DNA或RNA包裹于質(zhì)脂體，由于質(zhì)脂體具有磷脂雙層與胞膜相似，因此，可與細(xì)胞膜融合，將DNA轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞。
影響轉(zhuǎn)染效率差異的主要原因是細(xì)胞系間個(gè)體的差異，有的細(xì)胞系細(xì)胞膜通透性較好，質(zhì)脂體復(fù)合物較容易進(jìn)入細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率就高。又有的細(xì)胞系本生就不容易被轉(zhuǎn)染。其次脂類與DNA形成易于轉(zhuǎn)染結(jié)構(gòu)的特性存在負(fù)面效應(yīng)。其中主要的問題是毒性，表現(xiàn)為細(xì)胞聚集在一起，從壁上脫落。另為脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染易于受到血清中的脂肪與脂蛋白以及細(xì)胞外基質(zhì)中帶店成分，如硫酸軟骨素等干擾引起細(xì)胞死亡從而影響轉(zhuǎn)染效率。
客戶方需提供：
1．生長(zhǎng)狀況良好的宿主細(xì)胞株，一并提供細(xì)胞特性，培養(yǎng)條件及相關(guān)注意事項(xiàng)。
2．我們也可以為客戶代為購(gòu)買細(xì)胞并且提供凍存保種服務(wù)，客戶需要隨時(shí)郵寄。
3．提供質(zhì)粒，并說明質(zhì)粒大小，濃度，抗性，拷貝數(shù)等相關(guān)背景資料。