熒光素酶報告基因系統，是以熒光素為底物來檢測螢火蟲熒光素酶活性的一種報告系統， 測定酶與底物反應過程中釋放的生物熒光反映酶生物活性。螢火蟲熒光素酶基因作為報告基因，用于指示不同處理條件下基因的表達情況。

螢火蟲熒光素酶（Firefly luciferase）大小為 61 KDa，單亞基蛋白，能夠催化熒光素

（luciferin）氧化，生成氧化熒光素 oxyluciferin； 

螢火蟲螢光素酶催化 luciferin 發光的最強發光波長為 560 nm。

通常將目的基因的 5UTR 或者啟動子克隆至 Firefly Luciferase 的上游，或者 3UTR 或預期 RNAi 靶向序列克隆至 Firefly Luciferase 的下游，通過檢測螢火蟲熒光素酶與底 物的反應活性來檢測啟動子或者調控元件的轉錄調控作用。Renilla Luciferase 作為內參 來消除細胞數量或者轉染效率等實驗組間差異。



1.細胞鋪板，轉染時細胞密度：一般來說，當細胞密度達到60%～80%時進行轉染可以取得較高的 轉染效率。但不同細胞的最適轉染密度都不盡相同，因此建議在初次轉染某種細胞時，可以通過預實驗先確認該細胞最佳的轉染密度。

2. 轉染 根據效率評價，擴大體系進行相對應的轉染 例：12 孔板，體系 500 μL


3. 裂解細胞

待轉染至相應的時間后，棄培養液，PBS洗一次，將細胞裂解液完全覆蓋細胞充分混 勻，按以下方式加入細胞裂解液，充分裂解細胞，約 30 min~1 h



4. 熒光檢測

1）取 100 μL 細胞裂解液，加至酶標板中。按照實驗需要，可設置 3 孔-5 孔重復；

2）加入 5 μL 螢火蟲熒光素酶反應液，震板混勻，檢測螢火蟲熒光素酶的活力，檢測 盡量在 30 min 內完成。

5）分析數據。 注：因酶在不同細胞表達量有所不同，故底物量依不同細胞有所差異，優化區間可參考 5-20 μL。