總RNA提取
產品名稱： 總RNA提取
英文名稱： Extraction of RNA
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更新時間： 2023-07-31T09:56:51
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實驗介紹?
TRIZOL試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯仿時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層（無色）主要為RNA，有機層（黃色）主要為DNA和蛋白質。
總RNA提取（Trizol提取）實驗步驟
在收集到生物材料之后，最好能即刻進行RNA?制備工作。若需暫時儲存，則應以液氮將生物材料急速冷凍后，儲存于-80℃冷凍柜。在制備RNA?時，將存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。
1.?提取組織RNA?時，每50～100mg?組織用1ml?Trizol試劑對組織進行裂解；提取細胞RNA?時，先離心沉淀細胞，每5-10?╳106?個細胞加1ml?Trizol后，反復用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細胞；
?2.?將上述組織或細胞的Trizol裂解液轉入EP?管中,在室溫15~30C下放置5?分鐘；
?3.?在上述EP?管中，按照每1ml?TRIZOL?加0.2ml?氯仿的量加入氯仿，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15?秒，在室溫下（15℃～30℃）放置2～3?分鐘后，12000g（2℃～8℃）離心15?分鐘；
?4.?取上層水相置于新EP?管中,按照每1ml?TRIZOL?加0.5ml?異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15℃～30℃）放置10?分鐘,12000g（2℃～8℃）離心10?分鐘；
?5.?棄上清，按照每1ml?TRIZOL?加1ml?75%乙醇進行洗滌，渦旋混合，7500g（2℃～8℃）離心5?分鐘，棄上清；
?6.?讓沉淀的RNA?在室溫下自然干燥；
7.用Rnase-free?water?溶解RNA?沉淀。
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