?——即質譜法質量肽譜的分析技術服務

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質譜法質量肽譜是利用MALDI-TOF質譜儀將用特異性酶水解蛋白質后的肽片段進行分子質量測定。

質譜法質量肽譜分析是蛋白質一級結構研究中極為重要的手段之一，不但可以比較重組與天然蛋白質結果之間的同一性，確認基因工程上游和下游處理過程中是否發生差錯、重組產物中是否存在后轉譯化學修飾及未預期氨基酸的變異等，而且不同批次產品的肽譜比較可驗證工藝過程的穩定性。因此，肽譜分析在基因工程產品質控中尤為重要。

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質譜法質量肽譜分析是肽圖檢查法（藥典要求）的有效補充

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技術指標

■? 樣品要求：

目標蛋白質濃度：> 1μg/μl

目標蛋白質總量： > 10μg

目標蛋白質純度： > 90%

■? 4800 MALDI-TOF/TOF技術參數：

AB SCIEX公司的4800 plus MALDI-TOF/TOF質譜儀具有極高的分辨率和靈敏度。在對實際樣品的分析中分辨率可以達到18000，靈敏度達到ng級；一級質譜范圍：800-4000m/z，每張圖譜累加500個Laser Shots。

質譜法質量肽譜的譜圖

案例分析

■?? 樣品信息：XXXXXXXXX受體 - 抗體融合蛋白

■?? 樣品批號：XXXXXXXXX

■?? 對不同批次的重組XXXXXXXXX受體 - 抗體融合蛋白進行質量肽譜測試。結果發現批次間平行性較好，且可以通過一級質譜peaklist進行MASCOT檢索蛋白質樣品理論序列數據庫，獲得樣品覆蓋率信息，進一步確證批間平行性。

Q&A

1)???質譜法質量肽譜和HPLC肽圖檢查法之間的關系。

HPLC肽圖檢查法是基于色譜的肽圖檢查法，而質譜法質量肽譜是基于質譜的肽圖檢查法。質譜法突出的優點為可進行混合物分析，在一次測定中可以給出混合物中所有物質準確的分子量，它與酶解或化學降解結合后是確認基因工程藥物與天然組分一級結構一致性的好方法，具有快速、準確、結果直觀的優點，是對HPLC肽圖檢查法強有力的補充。

由于質譜法質量肽譜測定時上樣微量化，且樣品與基質混合不均一，使得蛋白質樣品的酶解肽段不能完全被檢測出來，從而遺漏部分樣品信息。而HPLC質量肽圖法，由于前端色譜柱的分離作用，可以檢測到更多低豐度的肽段信息，從而得到更加全面的樣品信息。

通過電噴霧離子化質譜（ESI/MS）進行肽圖測定檢查，既可以得到相應的色譜圖譜，也可以得到各色譜峰的細節信息，且可以得到相應的肽段分子量，通過檢索樣品理論序列可進一步確認各色譜峰肽段對應理論序列，可同時進行定性和定量，并對樣品的翻譯后修飾進行鑒別，可以為蛋白類藥物的質控提供更好的檢測參數和結構信息確認。