普通切片免疫熒光雙標(biāo)（三色）染色
產(chǎn)品名稱： 普通切片免疫熒光雙標(biāo)（三色）染色
英文名稱： 普通切片免疫熒光雙標(biāo)（三色）染色
產(chǎn)品編號： YK1562
產(chǎn)品價格： 90元/張
產(chǎn)品產(chǎn)地： 西安
品牌商標(biāo)： Y&KBIO
更新時間： 2024-10-12T16:50:40
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| 張 |
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一、免疫熒光雙標(biāo)染色詳情介紹： 免疫學(xué)的基本反應(yīng)是抗原-抗體反應(yīng)。由于抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性，所以當(dāng)抗原抗體發(fā)生反應(yīng)時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術(shù)就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體（或抗原）上，與其相應(yīng)的抗原（或抗體）結(jié)合后，在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。 二、實驗流程 1. 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min- 無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精 5min，自來水洗； 2. 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿檸檬酸（PH6.0)抗原修復(fù)液的高壓鍋內(nèi)進(jìn)行抗原修 復(fù)，噴氣計時 2.5min， 自然冷卻后將玻片置于 PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃 動洗滌 3 次，每次 5min； 3. BSA 或者血清封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴 加用5%BSA，室溫封閉 1h； 4. 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加按一定比例配好的兩個種屬不同的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C 孵育過夜（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）； 5. 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次8min。切片稍甩 干后在圈內(nèi)滴加與一抗種屬對應(yīng)的二抗，兩個種屬的顏色要區(qū)分開，覆蓋組織，室溫孵育 120min。之后玻片置于 PBS （PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 8min； 6. DAPI 染核：滴加DAPI，室溫孵育10min，之后玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上 晃動洗滌 3 次，每次 6min； 7. 封片：抗熒光淬滅劑封片； 8. 鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（DAPI 紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波 長420nm，發(fā)藍(lán)光；FITC激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光；CY3激發(fā)波長 510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光）。 三、染色結(jié)果判讀：DAPI染出來的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色，陽性表達(dá)為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的紅光和綠光。