Frdbio ®細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品名稱(chēng)： Frdbio ®細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng)：
產(chǎn)品編號(hào)： FrdE00017-1
產(chǎn)品價(jià)格： 0
產(chǎn)品產(chǎn)地： 中國(guó)
品牌商標(biāo)： Frdbio
更新時(shí)間： 2023-08-15T17:03:56
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 : 趙經(jīng)理
- 地址 : 光谷國(guó)際B座1513
- 郵編 :
- 所在區(qū)域 : 湖北省
- 電話 : 158****4543 點(diǎn)擊查看
- 傳真 : 點(diǎn)擊查看
- 郵箱 : 2633787800@qq.com
- 二維碼 : 點(diǎn)擊查看
Frdbio ?細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
|
貨號(hào) |
名稱(chēng) |
規(guī)格 |
|
FrdE00017-1 |
Frdbio ?細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 |
20T |
一.產(chǎn)品說(shuō)明
在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（PS）只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，故
可通過(guò)細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V 被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V 進(jìn)行熒光素（EGFP、FITC）標(biāo)記，以標(biāo)記了的Annexin
V 作為熒光探針，利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
二.產(chǎn)品保存方法
各組分應(yīng)在2-8℃條件下避光保存，有效期2年。
三.使用方法
1. 懸浮細(xì)胞離心（2000rpm 離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用不含EDTA 的胰酶消化收集（注：胰酶消化時(shí)間不易過(guò)長(zhǎng)，否則容易引起假陽(yáng)性）；
2. 用PBS
洗滌細(xì)胞二次（2000rpm 離心5min）收集1-5×105 細(xì)胞；
3. 加入500μL 的Binding Buffer（FrdE00017-2）懸浮細(xì)胞；
4. 加入5μL Annexin V-FITC（FrdE00017-1） 混勻后，室溫避光，反應(yīng)15-30min;
5. 用PBS
洗滌細(xì)胞一次（2000rpm 離心5min），500μL PBS 重懸細(xì)胞；
6. 室溫，避光，孵育5min，上機(jī)檢測(cè)。
7. 注：請(qǐng)?jiān)?span lang="EN-US">1 hour 內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測(cè)。
a. 熒光顯微鏡觀察
1) 滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2) 對(duì)于貼壁細(xì)胞來(lái)說(shuō)，也可直接用蓋玻片來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
1 將細(xì)胞于蓋玻片上生長(zhǎng)，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對(duì)照組；
2 用PBS
洗滌細(xì)胞兩次；
3 在500μL
的Binding Buffer 中加入5μL Annexin
V-FITC 混勻；
4 將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使蓋玻片表面均勻覆蓋；
5 避光、室溫反應(yīng)5 min。
3) 將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下濾光片（FITC）觀察，Annexin V-FITC 熒光信號(hào)呈綠色。
b. 流式細(xì)胞儀分析
1) 用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，激發(fā)波長(zhǎng)Ex=488 nm; 發(fā)射波長(zhǎng)Em=525nm。Annexin V-FITC 的綠色熒光通過(guò)
FITC 通道（FL1）檢測(cè)。
四.注意事項(xiàng)
1. 微量試劑取用前請(qǐng)離心集液。
2. Annexin V-FITC 避光保存及使用。
3. 本試劑盒適用于檢測(cè)活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不應(yīng)低于1×105，，不推薦用于檢測(cè)組織樣本。
4. 推薦使用懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。如果是貼壁細(xì)胞，需用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不當(dāng)，可能引起假陽(yáng)性，而用細(xì)胞刮子會(huì)造成細(xì)胞粘連成團(tuán)，而影響檢測(cè)。可將胰酶消化后細(xì)胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止進(jìn)一步的損傷。
5. 細(xì)胞固定后可能導(dǎo)致熒光的淬滅，請(qǐng)不要固定樣品。
6. 因檢測(cè)細(xì)胞的類(lèi)型、凋亡誘導(dǎo)劑種類(lèi)、使用的檢測(cè)儀器不同，因而流式檢測(cè)的熒光補(bǔ)償也不同，因此建議每次檢測(cè)均需使用未經(jīng)凋亡誘導(dǎo)處理的細(xì)胞作為對(duì)照，進(jìn)行熒光補(bǔ)償?shù)恼{(diào)節(jié)。
*本試劑僅供實(shí)驗(yàn)室研究使用