蛋白表達與純化技術服務

步驟1. 目標基因全基因合成：

1. 從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。
2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子優化。
3. 合成設計好的基因序列。

提供給客戶：目標基因（在T載體或常規穿梭載體上）及測序報告。

時間：2~3周，根據基因的大小而定.
步驟2. 目標基因亞克隆：

1. 擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
2. 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
3. 測序驗證構建質粒的準確性。

提供給客戶：正確構建的重組表達質粒，含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。
時間：1-2周

步驟3. E. coli表達菌株轉化及篩選：

1. 擴增并抽提構建好的表達質粒。
2. 將表達質粒轉化到高效的E.Coli表達菌株中。
3. 挑選陽性克隆于LB培養基中擴增并誘導表達目標蛋白。
4. SDS-PAGE電泳檢測培養后中目標蛋白的表達情況，并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達。
5. 可提供表達菌株：DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue, XL10 Golden, Rosetta-gami等。

提供給客戶：重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。

步驟4. 目標蛋白表達及純化：

1. 搖瓶培養1L重組細菌，誘導表達目標蛋白。
2. 通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的純化標簽，再純化獲得所需的目標蛋白（可選，構建表達載體時需加入合適的蛋白酶切位點）。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5. 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

提供給客戶：純化好的目標蛋白1~5mg及純化報告。如需增量可咨詢銷售人員。

本公司可為客戶提供全面的生物學服務平臺，主要有：
1）基因合成服務：引物設計合成，密碼子優化，DNA測序 , TA克隆

2) RNAi 服務，RNAi 載體構建、RNAi 導入優化和干擾評價

3) 蛋白表達與純化服務，包括哺乳動物、細菌、酵母和病毒表達

4) 多克隆抗體制備和純化：公司擁有cDNA文庫

5) 基因表達分析服務，實時定量PCR ，Western Blot，探針設計合成

6) 克隆服務，包括TA克隆、PCR 克隆和亞克隆、基因突變、載體設計和病毒構建包裝等專業服務

7）多肽合成：

8）細胞轉染：包括細胞培養，MTT檢測，瞬時穩定轉染