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單克隆簡易方法，新手操作一遍過，圖片是新手第二次驗證圖。

細(xì)胞系驗證按說明就可以，原代耐藥株等可討論痛點，

圖二要點說明，兩堆細(xì)胞，不生長單個的就不建議克隆，那堆生長順利的，后面會生長順利

留郵箱及實驗室名稱，后期穩(wěn)轉(zhuǎn)株P(guān)OTOCOL出來，合作原代建系，

痛點討論：離體處理、培養(yǎng)體系，穩(wěn)轉(zhuǎn)株藥加量篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株、凍存復(fù)蘇要點及各實驗室驗證陸續(xù)會有反饋數(shù)據(jù)。

離體活性更高可行方案：難消化下來大部分問題是活性這部影響的

20240630-種子庫精篩，粗篩

工業(yè)相關(guān)案例參考-噬斑等實驗參考
MDCK反向馴化（貼壁太牢，胰酶消化過程中對細(xì)胞損傷并不適合反向馴化）更新補充
經(jīng)消化統(tǒng)計與進展公布討論，
單細(xì)胞、肝原代、類器官、巨噬原代、系：傳代后一代難消化（離體處理步驟，離體活性）系常見消化不下來，文獻習(xí)慣，結(jié)合自己常年儲備統(tǒng)計，給出兩點參考。
難消化建議辦法：培養(yǎng)皿傳代前加層血清，加一層天然物膠質(zhì)稠度隔離，會好很多。深入研究的用戶可共享培養(yǎng)基稠度討論（無血清開發(fā)，天然產(chǎn)物與成分限定研發(fā)）
常見巨噬很多老師用細(xì)胞掛，因我們后面有長期培養(yǎng)基建系目的，超量培養(yǎng)，維持培養(yǎng)，細(xì)胞產(chǎn)物生產(chǎn)需更高質(zhì)量細(xì)胞提高產(chǎn)物產(chǎn)量，掛后細(xì)胞損傷大（近年有高濃度胰酶消化后吹打損傷細(xì)胞文獻，這里步闡述）有相關(guān)開發(fā)產(chǎn)品廠家，我們都可討論與共享技術(shù)部分與共同驗證（肝，胰島胰腺已開始合作實驗室建系共同驗證）
需細(xì)胞活性更高，建系目的，類器官（先建系，在規(guī)模培養(yǎng)，先二維，在三維成球）同道中人，共享提高組織到細(xì)胞，無外力（化學(xué)、機械）影響合作實驗驗證，也可通過類似問題，驗證細(xì)工方案可行性，統(tǒng)計理念重要。

提升種子庫質(zhì)量簡易方法，單克隆，慢培養(yǎng)（精篩，促篩）都是簡單可行方案，珍貴株推薦細(xì)工凍存復(fù)蘇，優(yōu)化胰酶等試劑與方法，各類難點痛點都可預(yù)實驗驗證。

培養(yǎng)方案：含血清可行性，可同時無血清同步

穩(wěn)轉(zhuǎn)株：超量加藥篩選，

凍存復(fù)蘇：基于DMSO方案，對凍存挑剔細(xì)胞系，原代高活率方案，無血清方案新型凍存液方案對比及問題統(tǒng)計

上述包括內(nèi)容較多，這里不展開。十年細(xì)胞培養(yǎng)問題統(tǒng)計后，呈上

20240622

單克隆準(zhǔn)株篩選，相關(guān)評項想推薦（給保種試劑耗材更多優(yōu)略理由）
簡單易上手步驟推廣目的是給單克隆提供一套可行，易行方法，用過我們potocol,建議文獻標(biāo)注下我公司名稱，另單克隆過程中，如能保存并發(fā)給我們細(xì)胞全盤（或者較大面積清晰圖片，我們給出同級別試劑耗材克隆圖片參考）
該目的是給出不同級別試劑耗材長期培養(yǎng)后對細(xì)胞是否有質(zhì)量影響統(tǒng)計參考依據(jù)。例如生長慢，成瘤不穩(wěn)定，后續(xù)實驗結(jié)果不理想，從細(xì)胞質(zhì)量上多一項評價。

文章標(biāo)注，
BeiJing XiGong biological technology co., LTD
Simple monoclonal(SM-1)

思考：國外建系都差不多兩天能穿代，可從最近幾年原代相關(guān)統(tǒng)計看，離體后細(xì)胞增殖都要4-7天，建系后應(yīng)該會更慢些，ATCC看過不少細(xì)胞系介紹，都說是慢慢優(yōu)化，這個問題困擾了很長時間，每天工作就是問題細(xì)胞統(tǒng)計，難養(yǎng)系統(tǒng)計的比較多，方法也看了不少，可慢慢優(yōu)化步驟還是套不進去（國內(nèi)了解幾個建系老師培養(yǎng)的都不是很順利），能提升系的增殖時間，這個單克隆開了竅，優(yōu)化準(zhǔn)株單克隆篩選，挑出更強壯細(xì)胞，大大提升細(xì)胞質(zhì)量，結(jié)合以前資料，成瘤不穩(wěn)定組單克隆后，大大提升細(xì)胞質(zhì)量，不成瘤組小心德是，開始提出解決思路是，慢操作（慢二氧化碳，慢生長，慢傳代）其實也是一種另外形式篩選單克隆（成干，甲基纖維素)也都是生長及較慢共同特性，不含血清也有一定生長影響，細(xì)胞要要適應(yīng)一段時間，那些狀態(tài)太差的，在生長過程中也被淘汰。慢操靈感作來自協(xié)和庫老師指導(dǎo)培養(yǎng)懸浮免疫細(xì)胞救助。
單克隆歷史有了解熟悉的老師路過，給些參考資料，我查下單克隆后細(xì)胞株建系情況，這部分資料還沒深入學(xué)習(xí)，暫時判斷，發(fā)明單克隆這個老師應(yīng)該建了不少細(xì)胞系，或者優(yōu)化了不少株，北京老師要有這方面資料，我可上門拜訪并學(xué)習(xí)。討論下國內(nèi)建系相關(guān)（有些注意事項這里不一一闡述了）

20240624

工業(yè)案例應(yīng)用一：禽類共生病毒的分離應(yīng)用：腺，豆、圓環(huán)的單種純化分離，理論方法，預(yù)實驗都比較理想，更多案例應(yīng)用還在技術(shù)儲備中，與各位老師合作討論難點痛點，北京實驗室可參與課題討論，就難點痛點問題，我們做些統(tǒng)計先，

國內(nèi)建系實驗室，生長時間過長的，也可考慮單克隆或慢培養(yǎng)兩種技術(shù)方案，難消化細(xì)胞建議從源頭考慮重新構(gòu)建，難點都可通過類似問題細(xì)工簡單解決方案驗證，例如：難消化，細(xì)工方案通過提高組織活性，可行性高，操作簡單，后面單克隆，穩(wěn)轉(zhuǎn)株，凍存復(fù)蘇等，都是基于可行性后，把間隙難點痛點先行驗證可行方案，在運用在建系上。

蛋白互作用對細(xì)胞維持培養(yǎng)要求高用戶，可把問題先討論后，細(xì)工給些參考建議。

國內(nèi)血清生產(chǎn)廠家，能固定原料，成本較高的廠商，工業(yè)應(yīng)用我們可參與篩出工業(yè)用細(xì)胞株，建系等合作，

20240628

成瘤前細(xì)胞優(yōu)化參考

成瘤前精篩選與粗篩選
這兩種方法都很簡單
精篩選：單克隆篩選，細(xì)工potocol方法簡單，我這個案例新手一遍就過，用戶給張單克隆圖，我們也行參與分析。（列出試劑耗材，操作概述，生長情況）我們給些建議，要能給出廠家貨號，我們給出備份廠家及貨號
粗篩選：成瘤不穩(wěn)定組參考，讓假株經(jīng)長時間培養(yǎng)后死掉，不用管它，通過長時間慢長起來的，都是克隆小島匯合細(xì)胞，前幾代慢培養(yǎng)可能慢，慢慢長起來后，就會順利生長。這個注意事項是慢長后容易成片，這是胰酶對細(xì)胞傷害很重要，我那個胰酶是重點解決問題配套試劑（胰酶敏感細(xì)胞篩選統(tǒng)計應(yīng)用過：難養(yǎng)系，如上皮、肝類、胰島胰腺類、巨噬類、腺類、膠質(zhì)類、免疫懸浮、乳腺上皮類、SV40,hTERT、原代類。胰酶敏感細(xì)胞生長特性：成團成片，堆疊式生長，錨著不牢，錨著太牢消化太久的，如何避免胰酶損傷，不能重做的可培養(yǎng)板加層血清解決，原代建系要考慮長久實驗需求的，我們可討論提高組織-細(xì)胞挺高活性，無外力（化學(xué)，機械）力可行性，原代建系我們重點室，藥廠多家實驗室共同驗證方案更可行，肝，胰島胰腺已開始籌備杭州，上海，廣州，北京開始統(tǒng)計合作實驗室，先行通點統(tǒng)計溝通可行方案，理論上全過并相關(guān)預(yù)實驗驗證順利后，一起完成建系實驗，藥廠拿走細(xì)胞可行方案，科研拿走文章，細(xì)工完成實施，
粗篩選簡述
瓶，慢養(yǎng)慢傳代慢生長，無損胰酶，少二氧化碳，減緩生長，減緩分化，理由：來自成干成球培養(yǎng)，難養(yǎng)細(xì)胞株痛點統(tǒng)計規(guī)律相似特點。分出一批評測，操作更簡單，給成瘤不穩(wěn)定組，提供一組備份條件，從成干特點上看（缺氧培養(yǎng)減緩細(xì)胞分化-這個特點又能起到明顯作用后，我們可能考慮離體后巨噬培養(yǎng)看看能否控制細(xì)胞分化，后面給生產(chǎn)型用戶做些技術(shù)儲備），優(yōu)勢挺大的，也給出一套備份技術(shù)儲備。
備注：如您對干細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)了解，相關(guān)參考也可發(fā)我下，我們一起驗證優(yōu)略。該思路來源類器官統(tǒng)計可行性及目前試劑耗材國產(chǎn)普及，我們目的是國產(chǎn)試劑耗材原代建系。凍存復(fù)蘇優(yōu)化應(yīng)該也是原代建系中重點，相關(guān)問題心得都可討論。

更多統(tǒng)計內(nèi)容：培養(yǎng)箱技術(shù)檢測（老培養(yǎng)箱二氧化碳給量過大普遍存在），二氧化碳廠家純度，遇到過低級別二氧化碳，問題找了兩年，試劑四處評測，最后是二氧化碳問題，建系是嚴(yán)謹(jǐn)活，每個細(xì)節(jié)到位，有必要國內(nèi)四個正規(guī)庫我們都能請來技術(shù)支持，包括細(xì)分領(lǐng)域大牛實驗室合作，學(xué)習(xí)請教問題十多年了，每每都能如愿。
例如：國產(chǎn)試劑耗材以前很少統(tǒng)計，現(xiàn)在有些高質(zhì)量的也可完成相關(guān)統(tǒng)計。

試劑耗材我們分種子庫級別，和普通級別，后面問題溝通請先說明試劑級別，兩種我們后續(xù)都有統(tǒng)計，例如單克隆圖，準(zhǔn)株，假株比例多少，就能判斷整體細(xì)胞水平，結(jié)合耗材手法判斷，即便使用種子庫級別試劑耗材，細(xì)胞處理過要求快，細(xì)胞也會假株數(shù)量增多，為更優(yōu)結(jié)果，啰嗦這莫多，為建系做好充足準(zhǔn)備，各位技術(shù)多多支持，沒必要藏著哈，特斯拉要不公布專利，自己打敗油車，得五百年（剛學(xué)完清華總裁班）。現(xiàn)在每年畢業(yè)生這莫多，沒點震撼突破，不行的。

基質(zhì)膠國內(nèi)生產(chǎn)合作
目前已有細(xì)胞工廠生產(chǎn)公司，能否加條合作生產(chǎn)線，維持培養(yǎng)上清項目合作，沒能力建自己的工廠，可項目不錯，超長時間維持培養(yǎng)后，上清開發(fā)配套因子、外泌體、基質(zhì)膠、ADC等科研得一些產(chǎn)品，我們自己業(yè)務(wù)就是各種細(xì)胞培養(yǎng)問題統(tǒng)計與配套產(chǎn)品開發(fā)，我們增強貼壁試劑配套細(xì)胞工廠生產(chǎn)優(yōu)勢很大，工業(yè)應(yīng)用也有不少，也可接些發(fā)酵罐生產(chǎn)轉(zhuǎn)成細(xì)胞工廠應(yīng)用含血清上游開發(fā)，這個優(yōu)勢是細(xì)胞緩沖能力強，生長完全控制（長、停、維持）這類到終末收前可換成無血清，維持培養(yǎng)比無血清時間會長很多。