單克隆簡易方法，新手操作一遍過，圖片是新手第二次驗證圖。

細胞系驗證按說明就可以，原代耐藥株等可討論痛點，

圖二要點說明，兩堆細胞，不生長單個的就不建議克隆，那堆生長順利的，后面會生長順利

留郵箱及實驗室名稱，后期穩轉株POTOCOL出來，合作原代建系，

痛點討論：離體處理、培養體系，穩轉株藥加量篩選穩轉株、凍存復蘇要點及各實驗室驗證陸續會有反饋數據。

離體活性更高可行方案：難消化下來大部分問題是活性這部影響的

20240630-種子庫精篩，粗篩

工業相關案例參考-噬斑等實驗參考
MDCK反向馴化（貼壁太牢，胰酶消化過程中對細胞損傷并不適合反向馴化）更新補充
經消化統計與進展公布討論，
單細胞、肝原代、類器官、巨噬原代、系：傳代后一代難消化（離體處理步驟，離體活性）系常見消化不下來，文獻習慣，結合自己常年儲備統計，給出兩點參考。
難消化建議辦法：培養皿傳代前加層血清，加一層天然物膠質稠度隔離，會好很多。深入研究的用戶可共享培養基稠度討論（無血清開發，天然產物與成分限定研發）
常見巨噬很多老師用細胞掛，因我們后面有長期培養基建系目的，超量培養，維持培養，細胞產物生產需更高質量細胞提高產物產量，掛后細胞損傷大（近年有高濃度胰酶消化后吹打損傷細胞文獻，這里步闡述）有相關開發產品廠家，我們都可討論與共享技術部分與共同驗證（肝，胰島胰腺已開始合作實驗室建系共同驗證）
需細胞活性更高，建系目的，類器官（先建系，在規模培養，先二維，在三維成球）同道中人，共享提高組織到細胞，無外力（化學、機械）影響合作實驗驗證，也可通過類似問題，驗證細工方案可行性，統計理念重要。

提升種子庫質量簡易方法，單克隆，慢培養（精篩，促篩）都是簡單可行方案，珍貴株推薦細工凍存復蘇，優化胰酶等試劑與方法，各類難點痛點都可預實驗驗證。

培養方案：含血清可行性，可同時無血清同步

穩轉株：超量加藥篩選，

凍存復蘇：基于DMSO方案，對凍存挑剔細胞系，原代高活率方案，無血清方案新型凍存液方案對比及問題統計

上述包括內容較多，這里不展開。十年細胞培養問題統計后，呈上

20240622

單克隆準株篩選，相關評項想推薦（給保種試劑耗材更多優略理由）
簡單易上手步驟推廣目的是給單克隆提供一套可行，易行方法，用過我們potocol,建議文獻標注下我公司名稱，另單克隆過程中，如能保存并發給我們細胞全盤（或者較大面積清晰圖片，我們給出同級別試劑耗材克隆圖片參考）
該目的是給出不同級別試劑耗材長期培養后對細胞是否有質量影響統計參考依據。例如生長慢，成瘤不穩定，后續實驗結果不理想，從細胞質量上多一項評價。

文章標注，
BeiJing XiGong biological technology co., LTD
Simple monoclonal(SM-1)

思考：國外建系都差不多兩天能穿代，可從最近幾年原代相關統計看，離體后細胞增殖都要4-7天，建系后應該會更慢些，ATCC看過不少細胞系介紹，都說是慢慢優化，這個問題困擾了很長時間，每天工作就是問題細胞統計，難養系統計的比較多，方法也看了不少，可慢慢優化步驟還是套不進去（國內了解幾個建系老師培養的都不是很順利），能提升系的增殖時間，這個單克隆開了竅，優化準株單克隆篩選，挑出更強壯細胞，大大提升細胞質量，結合以前資料，成瘤不穩定組單克隆后，大大提升細胞質量，不成瘤組小心德是，開始提出解決思路是，慢操作（慢二氧化碳，慢生長，慢傳代）其實也是一種另外形式篩選單克?。ǔ筛?，甲基纖維素)也都是生長及較慢共同特性，不含血清也有一定生長影響，細胞要要適應一段時間，那些狀態太差的，在生長過程中也被淘汰。慢操靈感作來自協和庫老師指導培養懸浮免疫細胞救助。
單克隆歷史有了解熟悉的老師路過，給些參考資料，我查下單克隆后細胞株建系情況，這部分資料還沒深入學習，暫時判斷，發明單克隆這個老師應該建了不少細胞系，或者優化了不少株，北京老師要有這方面資料，我可上門拜訪并學習。討論下國內建系相關（有些注意事項這里不一一闡述了）

20240624

工業案例應用一：禽類共生病毒的分離應用：腺，豆、圓環的單種純化分離，理論方法，預實驗都比較理想，更多案例應用還在技術儲備中，與各位老師合作討論難點痛點，北京實驗室可參與課題討論，就難點痛點問題，我們做些統計先，

國內建系實驗室，生長時間過長的，也可考慮單克隆或慢培養兩種技術方案，難消化細胞建議從源頭考慮重新構建，難點都可通過類似問題細工簡單解決方案驗證，例如：難消化，細工方案通過提高組織活性，可行性高，操作簡單，后面單克隆，穩轉株，凍存復蘇等，都是基于可行性后，把間隙難點痛點先行驗證可行方案，在運用在建系上。

蛋白互作用對細胞維持培養要求高用戶，可把問題先討論后，細工給些參考建議。

國內血清生產廠家，能固定原料，成本較高的廠商，工業應用我們可參與篩出工業用細胞株，建系等合作，

20240628

成瘤前細胞優化參考

成瘤前精篩選與粗篩選
這兩種方法都很簡單
精篩選：單克隆篩選，細工potocol方法簡單，我這個案例新手一遍就過，用戶給張單克隆圖，我們也行參與分析。（列出試劑耗材，操作概述，生長情況）我們給些建議，要能給出廠家貨號，我們給出備份廠家及貨號
粗篩選：成瘤不穩定組參考，讓假株經長時間培養后死掉，不用管它，通過長時間慢長起來的，都是克隆小島匯合細胞，前幾代慢培養可能慢，慢慢長起來后，就會順利生長。這個注意事項是慢長后容易成片，這是胰酶對細胞傷害很重要，我那個胰酶是重點解決問題配套試劑（胰酶敏感細胞篩選統計應用過：難養系，如上皮、肝類、胰島胰腺類、巨噬類、腺類、膠質類、免疫懸浮、乳腺上皮類、SV40,hTERT、原代類。胰酶敏感細胞生長特性：成團成片，堆疊式生長，錨著不牢，錨著太牢消化太久的，如何避免胰酶損傷，不能重做的可培養板加層血清解決，原代建系要考慮長久實驗需求的，我們可討論提高組織-細胞挺高活性，無外力（化學，機械）力可行性，原代建系我們重點室，藥廠多家實驗室共同驗證方案更可行，肝，胰島胰腺已開始籌備杭州，上海，廣州，北京開始統計合作實驗室，先行通點統計溝通可行方案，理論上全過并相關預實驗驗證順利后，一起完成建系實驗，藥廠拿走細胞可行方案，科研拿走文章，細工完成實施，
粗篩選簡述
瓶，慢養慢傳代慢生長，無損胰酶，少二氧化碳，減緩生長，減緩分化，理由：來自成干成球培養，難養細胞株痛點統計規律相似特點。分出一批評測，操作更簡單，給成瘤不穩定組，提供一組備份條件，從成干特點上看（缺氧培養減緩細胞分化-這個特點又能起到明顯作用后，我們可能考慮離體后巨噬培養看看能否控制細胞分化，后面給生產型用戶做些技術儲備），優勢挺大的，也給出一套備份技術儲備。
備注：如您對干細胞培養相關了解，相關參考也可發我下，我們一起驗證優略。該思路來源類器官統計可行性及目前試劑耗材國產普及，我們目的是國產試劑耗材原代建系。凍存復蘇優化應該也是原代建系中重點，相關問題心得都可討論。

更多統計內容：培養箱技術檢測（老培養箱二氧化碳給量過大普遍存在），二氧化碳廠家純度，遇到過低級別二氧化碳，問題找了兩年，試劑四處評測，最后是二氧化碳問題，建系是嚴謹活，每個細節到位，有必要國內四個正規庫我們都能請來技術支持，包括細分領域大牛實驗室合作，學習請教問題十多年了，每每都能如愿。
例如：國產試劑耗材以前很少統計，現在有些高質量的也可完成相關統計。

試劑耗材我們分種子庫級別，和普通級別，后面問題溝通請先說明試劑級別，兩種我們后續都有統計，例如單克隆圖，準株，假株比例多少，就能判斷整體細胞水平，結合耗材手法判斷，即便使用種子庫級別試劑耗材，細胞處理過要求快，細胞也會假株數量增多，為更優結果，啰嗦這莫多，為建系做好充足準備，各位技術多多支持，沒必要藏著哈，特斯拉要不公布專利，自己打敗油車，得五百年（剛學完清華總裁班）?，F在每年畢業生這莫多，沒點震撼突破，不行的。

基質膠國內生產合作
目前已有細胞工廠生產公司，能否加條合作生產線，維持培養上清項目合作，沒能力建自己的工廠，可項目不錯，超長時間維持培養后，上清開發配套因子、外泌體、基質膠、ADC等科研得一些產品，我們自己業務就是各種細胞培養問題統計與配套產品開發，我們增強貼壁試劑配套細胞工廠生產優勢很大，工業應用也有不少，也可接些發酵罐生產轉成細胞工廠應用含血清上游開發，這個優勢是細胞緩沖能力強，生長完全控制（長、停、維持）這類到終末收前可換成無血清，維持培養比無血清時間會長很多。