產品優勢  

1.低背景熒光：與Ca²?結合后顯著增強熒光信號，能有效降低背景干擾，提高檢測靈敏度。

2.適用范圍廣：通過熒光顯微鏡、流式細胞術、熒光光譜分析和熒光酶標儀等，監測細胞內游離Ca²?濃度的動態變化

3.線粒體靶向性：通過膜電位依賴富集于線粒體中，避免與其他細胞器（如內質網）交叉標記

產品介紹

鈣離子檢測在眾多生物學研究中至關重要。能夠與Ca²?結合并產生光譜響應的熒光探針，使研究人員得以通過熒光顯微鏡、流式細胞術、熒光光譜分析和熒光酶標儀等技術手段，監測細胞內游離Ca²?濃度的動態變化。對于存在較強自發熒光的細胞和組織樣本，長波長鈣指示劑Rhod-2可作為Fluo-3的理想替代選擇。其中Rhod-2 AM是該探針的細胞膜滲透性衍生物。

實驗方案

溶液配制

1.儲備溶液配制

Rhod-2 AM 儲備溶液

在無水 DMSO 中制備 2 至 5 mM Rhod-2 AM 儲備溶液。

2.工作溶液配制

Rhod-2 AM 工作溶液

1.實驗當天，將 Rhod-2 AM 溶解在 DMSO 中，或將等份指示劑儲備溶液解凍至室溫。

2.選擇合適緩沖液（如Hanks和Hepes緩沖液）配制2-20 µM Rhod-2 AM工作液，并添加0.04% Pluronic® F-127表面活性劑。對于大多數細胞系，推薦使用4-5 μM終濃度的Rhod-2 AM。具體染料加載濃度需通過實驗優化。

注意：非離子型表面活性劑 Pluronic® F-127可增強Rhod-2 AM水溶性?？梢詮陌傥炠徺I購買。

注意：若細胞存在有機陰離子轉運體，可在工作液中添加1-2 mM丙磺舒（孔板內終濃度0.5-1 mM）以減少水解后染料的外漏。各種 ReadiUse 丙磺舒產品，包括水溶性、鈉鹽和穩定溶液，均可從百螢購買。

操作步驟

以下是推薦的Rhod-2 AM加入活細胞的方案。 該方案僅提供指南，實際應根據您的特定需求進行修改。

1.將細胞在生長培養基中培養過夜。

2.次日，將 1X Rhod-2 AM 工作溶液添加到細胞孔板中。

注意：如果您的化合物干擾血清，請在上樣前用新鮮的 HHBS 緩沖液替換生長培養基。

3.將載有染料的孔板在細胞培養箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分鐘。

注意：部分細胞系延長孵育時間至1小時以上可增強信號強度

4.用 HHBS 或您選擇的緩沖液（包含陰離子轉運蛋白抑制劑，例如 1 mM 丙磺舒，如果適用）替換染料工作溶液，以去除任何多余的探針。

5.根據需要添加刺激劑，同時使用配備 TRITC 濾光片組的熒光顯微鏡或包含可編程液體處理系統（例如 FDSS、FLIPR 或 FlexStation）的熒光酶標儀在 Ex/Em = 540/590 nm 處進行熒光監測。