E.coli Origami 2(DE3)?感受態細胞

??保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌E.coli Origami 2(DE3)?感受態細胞菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞。Origami 2系列菌株是集合BL21，Tuner和Origami三種菌株的優點于一身，細胞質內生成二硫鍵，有助于含二硫鍵蛋白的活性蛋白形成。

基因型：Δ(ara-leu)7697?ΔlacX74?ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F′[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB (StrR, TetR)

特點：1. Origami 2菌株包含突變的硫氧還蛋白還原酶（thioredoxin reductase）(trxB)?和谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表達主要還原途徑的兩個關鍵酶。有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白，增強蛋白的可溶性。2.?與Origami系列感受態相比，Origami 2系列感受態細胞是卡那敏感的，這使得該菌株適用范圍更廣。3.?亮氨酸生長缺陷型宿主菌。具鏈霉素，四環素抗性。pUC19質粒檢測，轉化效率可達107cfu/μg DNA。

2.使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，?150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。

5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，?37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．剛化凍的細胞轉化效率最高，避免反復化凍。

2．質粒質量和濃度等的差異會使轉化效率有所下降。

*本試劑僅供實驗室研究使用