國內庫成纖維 ：細工列出各類細胞系，全部由國內正規庫（公司來源暫不做討論范圍內）

3T3 swiss

3T3L1

3T6swiss

BALB/C 3T3

CCC-ESF-1

CCC-HPF-1

HFSF

MEF

MRC-5

NBTF

NIH3T3

OP9

PA12

PA317

Pt67

RCBBF

RCFBF

RYTF

UMNSAH/DF1

WI-38

WI38/VA13

φ2

二倍體對完全培養基PH要求嚴格，大廠家及現配現用是個不錯的方法。

密度抑制解決：不要長太滿，勤傳代，生長天數較長的先摸出適應的培養條件，進口耗材，瓶推薦（皿PH變化快）耗材U型低是這類細胞研究很早推出的，目前類器官應用較多。-種子及前期大量擴增需求。

分化后培養狀態探討，這種狀態下的細胞增殖較慢（大多數細胞有成纖維型生長成圓形），結合目前培養耗材更新（耗材底部營養可交換，成層生長可以試下，也是類器官方面耗材主流）理論上可行，國內正規庫在維持培養上已經有十幾年的經驗，細胞一年內維持培養還比較容易實現，也是密度限制一種可行性驗證。

20230828:線粒體大小有實驗室做過統計及測量數據，能否共享，我們做些建系相關統計，膠質2-4um可進出細胞。正常肝40um，其他組織有老師做長期統計的嗎？

用膠原、賴氨酸等處理下板子，增加貼壁能力的目的實驗，可參考我司促貼壁試劑，效果更優，最近實驗驗證是RAW264.7細胞促貼壁驗證，增殖過程中細胞形態無變化，也說明促貼壁試劑對細胞無影響。

胰酶消化：我司優化后胰酶優勢，不怕消化過，充分利用胰酶化學作用使細胞成單個狀態，傳代后的細胞，不需細胞膜恢復，直接增殖生長。

3T3一L1傳代需小牛血清理由：當細胞從快速分裂到匯合和接觸抑制狀態時，細胞經歷脂肪樣轉化前脂肪。培養基中的高血清含量可提高脂肪積累[PubMed ID：4426090 ]

Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37C to facilitate dispersal.

Volumes used in this protocol are for 75 cm2 flask; proportionally reduce or increase amount of dissociation medium for culture vessels of other sizes. Corning? T-75 flasks (catalog #430641) are recommended for subculturing this product.--該耗材國內應用較少，前期種子階段培養推薦康寧-3799-96孔U型低耗材替代。

二甲基亞砜敏感，解凍后應立即去除冷凍保護劑，在9-10毫升完整的完全培養基溶液中進行緩慢離心（125×g，10分鐘）

上述要點對后面有類器官，外囊泡，需大量擴增細胞要求的實驗需求的用戶，需細胞數量與質量提升做好基礎培養可深入討論，討論前需詳細告知試劑耗材及操作步驟，實驗目的需求或細胞具體要求。成纖維因子自分泌研究用戶可注明，我司目前有些設備資源可共享，運作成本較高，詳細可討論。

20220716進展

成團成片特性細胞大多數上皮（有半懸半貼壁特性，正常組織細胞系都有這類特性，常規手法凍存復蘇后活率低，恢復生長時間長）

免疫懸浮類離體后前幾代培養，或這類特性細胞系類前期傳代培養中。

無血清培養基應用的細胞-工業應用的解決團聚成份已有成熟應用，無血清開發也是用化學成份替代胎牛找到更合適的成份與比例。不含血清培養上清利用替代血清成份已有幾個大公司在應用。無血清上清成份分析課題也有不少實驗室在延展實驗。

我們平時統計相關問題，在團聚與解離細胞培養馴化技術儲備應用有些方法，目的是在提高轉染效率，凍存復蘇提高細胞活率，復蘇后救助細胞。精準控制團聚與解離還有待更多實驗數據（細胞反向馴化也有些方法儲備），在融合細胞過程中，利用團聚與解離特點可試試能否提高融合效率，有這方面有想法的用戶，可討論具體。列出細胞名稱，培養特點，問題描述。融合后雜交瘤優化培養基培養方案已有（也適合二倍體類培養基減血清方案）WI-38 MRC5這類可標注。

細工保種備份國產體系推薦

細工開發相關試劑：Optimized Trypsin 維持培養基 增強型貼壁試劑 轉染試劑 PBS（臨床級別原料）

20230827：長效谷氨酰胺常用DMEM，1640( 歡迎各位海歸、工廠評測并備份國產體系，評測中各種問題互相討論學習（建系類應用配套相關培養基，保種級別，申請試用可來信告知，我們常年保種體系篩出的成熟體系，使用中問題，培養中問題都可討論），長期評測。類器官，人造肉推薦系列培養體系，推薦理由是省去補加谷氨酰胺，與原代培養特性類似，需胚胎培養基成份加減我司全部現貨，來源不同組織培養特點不一，可詳細討論，細工對常見問題統計較多，技術儲備足，配套方案，可行方案較多。各類成份盡量使用臨床級別，成本較高。穩定性優勢很明顯，大包裝等減少成本預算。

上述長效DMEM、1640 、 PBS（臨床級別原料）一升包裝100元，評測方法推薦慢病毒腺病毒上清效價長期評測比較，細工產品有明顯優勢。可與任意知名品牌做比較。