細(xì)胞增殖實驗
產(chǎn)品名稱： 細(xì)胞增殖實驗
英文名稱： cell proliferation
產(chǎn)品編號：
產(chǎn)品價格： 2000
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
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更新時間： null
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細(xì)胞增殖實驗
摘要：在293T細(xì)胞中過表達(dá)human Oct-4基因， 通過CCK-8方法對Oct-4過表達(dá)細(xì)胞組、空細(xì)胞組與陰性對照組的細(xì)胞增殖進(jìn)行定量，研究Oct-4基因?qū)?93T細(xì)胞增殖能力的影響。實驗結(jié)果顯示Oct-4基因的表達(dá)促進(jìn)293T細(xì)胞的增殖能力。為進(jìn)一步深入研究Oct-4基因的功能提供實驗數(shù)據(jù)。
關(guān)鍵詞：Oct-4，CCK??-8，細(xì)胞增殖，293T
一、?實驗原理
細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。單細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細(xì)胞生物，以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞，用來補(bǔ)充體內(nèi)衰老和死亡的細(xì)胞；同時，多細(xì)胞生物可以由一個受精卵，經(jīng)過細(xì)胞的分裂和分化，最終發(fā)育成一個新的多細(xì)胞個體。通過細(xì)胞分裂，可以將復(fù)制的遺傳物質(zhì)，平均地分配到兩個子細(xì)胞中去。細(xì)胞增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。細(xì)胞增殖的研究方法有很多，主要包括：BrdU，EdU，CCK-8等方法。
二、?實驗?zāi)康?/strong>
用質(zhì)粒Oct-4-EGFP轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞與正常細(xì)胞組、陰性對照組進(jìn)行比較分析，考察Oct-4基因?qū)?xì)胞的增殖能力產(chǎn)生的影響。采用CCK-8 法對3組細(xì)胞進(jìn)行比較分析。
三、?實驗步驟
實驗共分以下5個主要步驟：
1.?收集細(xì)胞：
收集細(xì)胞：將293T細(xì)胞消化后制成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后，每組細(xì)胞配成一定濃度的單細(xì)胞懸液。
2.?細(xì)胞鋪板：
細(xì)胞配成2×104cell/ml后，每孔鋪100μl細(xì)胞，即2000cell/well。一般每個樣品設(shè)5~6個復(fù)孔，邊緣孔加100μl無菌水或者PBS。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3.?質(zhì)粒轉(zhuǎn)染：
???? 16h后，按照轉(zhuǎn)染試劑說明書轉(zhuǎn)染細(xì)胞（0.2μg質(zhì)粒，0.5μl和元生物轉(zhuǎn)染試劑）。
4.?細(xì)胞培養(yǎng)6、24、48、72h后CCK-8處理，酶標(biāo)儀檢測：
轉(zhuǎn)染后， 在每個檢測時間點加入10μl的CCK-8于孔中，無需換液。3h后，酶標(biāo)儀檢測450nm OD值。
5.?統(tǒng)計分析：
GraphPad Prism（Ver5，GraphPad Software） 作圖，并進(jìn)行雙側(cè)t檢驗。
四、?實驗結(jié)果
??????????????????????????????????????????????????? 表1. 293T過表達(dá)Oct-4基因CCK-8檢測數(shù)據(jù)（平均值，每組五次重復(fù)）
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??????????????????????????????????????????????????????圖1. 過表達(dá)Oct-4對293T細(xì)胞增殖能力的影響
結(jié)論：從實驗結(jié)果統(tǒng)計分析可以發(fā)現(xiàn)，293T細(xì)胞在過表達(dá)Oct-4-EGFP后，72h時增殖能力均高于空細(xì)胞組以及對照組（p<0.001）。
五、?參考文獻(xiàn)
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