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<div id="a1" class="tab-pane active"> <div id="d1" class="p2"> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>細胞介紹</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;">UACC-812 是一種具有上皮樣形態(tài)的細胞系，分離自一名 43 歲白人女性導(dǎo)管癌患者的乳腺。，可用于癌癥研究。1986 年從乳房切除術(shù)中切除的乳腺組織中建立，以切除導(dǎo)管癌（II 期，IV 級）。手術(shù)前，患者已經(jīng)接受了大量化療。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">這些細胞表現(xiàn)出 HER-2/neu 致癌基因序列 15 倍的擴增。它們對雌激素受體、孕激素受體和 P 糖蛋白呈陰性。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>細胞特性</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;">1）&nbsp;來源：43 歲&nbsp;白人女性&nbsp;乳腺</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">2）&nbsp;形態(tài)：上皮細胞樣&nbsp;貼壁生長</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">3）&nbsp;含量：&gt;1x10^6&nbsp;&nbsp;細胞數(shù)</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">4）&nbsp;規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">5)&nbsp;&nbsp;用途：僅供科研使用。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>運輸和保存</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;">（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>細胞接收后的處理</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;">1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。 </span></p> <p><span style="font-size: 20px;">2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10&times;，20&times;）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。&nbsp;&nbsp;收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備</strong></span></p> <p><span style="color: #c00000; font-size: 20px;"><strong>1）&nbsp;準(zhǔn)備L15（推薦iCell-0009）培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；&nbsp;20 ng/ml EGF，&nbsp;雙抗，1%。</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><span style="color: #c00000;"><strong>2）&nbsp;培養(yǎng)條件：氣相：空氣，100%；</strong></span><strong>該細胞培養(yǎng)不能通入CO2，如果沒有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的，可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中每天將細胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。</strong>&nbsp;<strong><span style="color: #c00000;">溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。</span></strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;">3）&nbsp;凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>二．細胞處理</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>1）&nbsp;凍存細胞的復(fù)蘇</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;">將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">2）&nbsp;細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;">1.&nbsp;棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">2.&nbsp;加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。&nbsp;</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;"><strong>下面T25瓶為例；</strong></span></p> <p><span style="font-size: 20px;">1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1&times;10^6~1&times;10^7個活細胞/ml.</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1&times;10^6~1&times;10^7個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。</span></p> <p><span style="font-size: 20px;">3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。</span></p> </div> </div>