【評價原理】

斑馬魚的鰾從器官進化、組織結構以及生物學等多個層面都類似于哺乳動物的肺泡。

細菌性肺炎：注射給予LPS建立斑馬魚細菌性肺炎模型。LPS是脂質和多糖的復合物，來源于革蘭氏陰性菌細胞壁的外膜，是內毒素的主要成分。接觸一定量的LPS會引起機體支氣管炎、肺炎、肝炎及脂多糖血癥。

通過使用轉基因中性粒細胞綠色熒光斑馬魚和轉基因巨噬細胞綠色熒光斑馬魚，在熒光顯微鏡下可以直接觀察斑馬魚中性粒細胞和巨噬細胞，并分時間點視頻記錄巨噬細胞和中性粒細胞溢出血管情況，使用實時熒光定量PCR儀可獲得基因表達水平，通過制作組織病理切片觀察斑馬魚魚鰾部位的病理結構變化。

【實驗方案】

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和服用抗炎藥組。其中，模型對照組與抗炎藥組都注射了等量的LPS建立細菌性肺炎模型。抗炎藥組在注射了LPS的同時攝入吲哚美辛之類的抗肺炎抗炎藥。

服用一段時間抗肺炎抗炎藥后，我們在熒光顯微鏡下拍攝斑馬魚中性粒細胞和巨噬細胞的數量，并分時間點視頻記錄巨噬細胞和中性粒細胞溢出血管情況，用實時熒光定量PCR儀檢測TNF-α、IL-1β值，同時制作成病理切片觀察魚鰾部位的病理結構變化。

【結果展示】

圖1. 斑馬魚中性粒表型圖

黃色虛線區域為魚鰾，綠色熒光顆粒為中性粒細胞

可以看到，抗炎藥組斑馬魚魚鰾位置處的中性粒細胞聚集情況明顯改善。

圖2. 斑馬魚巨噬細胞表型圖

黃色虛線區域為魚鰾，綠色熒光為巨噬細胞

可以看到，抗炎藥組斑馬魚魚鰾位置處的巨噬細胞聚集情況明顯改善。

圖3. TNF-α基因表達水平

與模型對照組比較，*p < 0.05

可以看到，抗炎藥組能顯著抑制斑馬魚的炎癥基因TNF-α表達水平。

圖4. IL-1β基因表達水平

與模型對照組比較，**p < 0.01

可以看到，抗炎藥組能顯著抑制斑馬魚的炎癥基因IL-1β表達水平。

圖5. 魚鰾部位病理切片

從病理切片中能看出來，抗炎藥組斑馬魚魚鰾病理結構與正常對照組相似，未出現模型對照組滲入的炎性細胞明顯增多的情況。

【評價結論】

1.經過每組30尾斑馬魚的對比實驗，抗炎藥組能顯著抑制中性粒細胞和巨噬細胞的聚集，能顯著抑制炎癥基因表達水平，能改善炎性浸潤情況。

2.本實驗證實了吲哚美辛具有顯著的細菌性肺炎防治作用。

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