PhosphoWorks 比色法MESG磷酸鹽檢測試劑盒 *UV吸收*是美國AAT Bioquest生產的用于檢測ADP的試劑盒，ADP參與許多生物反應，例如蛋白激酶。 我們的ADP分析試劑盒可通過監測ADP的形成來普遍用于分析蛋白激酶反應，而ADP的形成與酶磷酸轉移酶的活性成正比，并通過熒光法進行測量。 該試劑盒提供了一種快速，簡單且均一的測定ADP形成或消耗的測定方法。 該測定是連續的，并且可以容易地適于自動化。 該套件很方便，需要最少的動手時間。 由于蛋白激酶與諸如癌癥和其他增生性疾病，炎性疾病，代謝紊亂和神經系統疾病等疾病的廣泛相關性，因此參與藥物開發的研究人員對蛋白激酶很感興趣。 大多數商業化的蛋白激酶檢測試劑盒都是基于對磷酸肽形成或ATP缺失的監測。 百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的PhosphoWorks 比色法MESG磷酸鹽檢測試劑盒 *UV吸收*。

產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

1.運行激酶反應（20 μL）
2.添加ADP傳感器緩沖液（20 μL）
3.添加ADP傳感器（10 μL）
4.在室溫下孵育15分鐘-1小時
5.監控熒光強度

溶液制備

1.標準溶液

磷酸鹽標準
向950μL去離子水或酶反應緩沖液中添加50μL1 mM KH2PO4（組分D），得到50μM磷酸鹽標準溶液（PS7）。 取50μM磷酸鹽標準溶液，并進行1：2連續稀釋，以用去離子水或酶反應緩沖液連續稀釋磷酸鹽標準液（PS6-PS1）。

2.工作溶液

2.1將500 μL ddH2O加入小瓶MESG底物（組分B）。 渦旋混合均勻，得到MESG底物溶液。 注意：250 μl足夠一塊板。

2.2向小瓶嘌呤核苷磷酸化酶（PNP；組分C）中加入100 μL ddH2O。 渦旋混合均勻，得到嘌呤核苷磷酸化酶溶液。

2.3將全部體積的MESG底物溶液和嘌呤核苷磷酸化酶溶液添加到分析緩沖液（組分A）的瓶子中，并充分混合以得到工作溶液。 將工作溶液放在冰上。 注意：此工作溶液在冰上至少可穩定4小時。 不建議將工作溶液冷凍進行其他測定。 為了獲得理想的結果，需要紫外線透明的板或比色皿。 由于該測定法對Pi的敏感性很高，因此使用無Pi的實驗室器具極為重要。

樣品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ADP標準品和測試樣品的布局。 SD = ADP標準（SD1-SD7，0.05至30 uM）; BL =空白對照； TS =測試樣品。

表2.每個孔的試劑組成。

1.根據表1和表2提供的布局，準備磷酸鹽標準品（PS），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 μL試劑代替50 μL。

2.將50 μL工作溶液添加到磷酸鹽標準液，空白對照和測試樣品的每個孔中，以使總測定體積為100 μL /孔。 徹底混合試劑。 對于384孔板，請向每個孔中添加25 μL工作溶液，總體積為50 μL /孔。

3.在室溫下孵育30分鐘。

4.用酶標儀或分光光度計在360 nm處監測吸光度。 注意：對于需要總體積大于100 μL的比色杯分析，在測量吸收之前，應按比例將樣品和分析試劑的體積相乘。