????????????????????????????????小鼠胚胎成纖維細胞
(C3H?10T1/2?2A6)
貨號：MEMCL-004
細胞介紹
1972年從C3H小鼠胚胎細胞中分離建立；在同系小鼠體內不能成瘤，未發現自發轉化；化學制劑很容易引起該細胞發生轉化。
細胞特性
1）?來源：小鼠胚胎
2）?形態：成纖維細胞樣，貼壁生長
3）?含量：>1x106?個/mL
4）?污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）?規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝
運輸和保存：使用含有優質胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。
細胞用途：僅供科研使用。
???????????????????????
細胞培養步驟
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）?準備Eagles?Basal培養基(Eagles?Basal?medium:GIBCO,貨號21010-046,?添加NaHCO3?1.5g/L,?2?mM?L-谷氨酰胺，及EBSS)，90%；優質胎牛血清，10%，添加1%?PS。
2）?培養條件：?氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。?溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）?凍存液：90%完全培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．?細胞處理：
1）?復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）?細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.?棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.?加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM?EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.?按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.?將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
注意事項：?
1.?收到細胞后，若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。
2.?所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
賽百慷（上海）生物技術股份有限公司
?????地址：中國（上海）自由貿易試驗區希雅路11號14號樓4樓
??????電話：021-61522780
??????網址：www.icellbioscience.com
">