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Illumina Solexa測序原理

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產品名稱: Illumina Solexa測序原理

英文名稱: Solexa測序原理

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?????Illumina Solexa測序原理

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1.?????? 文庫制備

將基因組DNA打斷成幾百個堿基(或更短)的小片段,并在兩個末端加上接頭(adapter

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2.?????? 橋式PCR產生DNA

IIIumina高通量測序芯片表面連接有一層單鏈引物,兩端連接測序接頭的單鏈DNA片段通過與芯片表面的引物堿基互補結合,引物擴增成為雙鏈后,使雙鏈變性成為單鏈,該單鏈DNA的一端就被“固定”在芯片上,而單鏈DNA的另一端隨機和附近的另外一個引物互補,也被“固定”住,行成“橋(bridge)”。經過反復30輪擴增后,每個單分子得到了約1000倍擴增,成為單克隆“DNA簇”。

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3.?????? 利用可逆化學阻斷技術測序

利用邊合成邊測序(Sequencing by synthesis)的原理,加入改造過的DNA聚合酶和帶有4種熒光標記的dNTP。這些核苷酸是“可逆終止子”,其3羥基末端帶有可化學切割的部分,每個循環只容許摻入單個堿基。去除其他多余的dNTP后,用激光掃描反應板表面,讀取每條模板序列第一輪反應聚合上去的核苷酸種類。隨后將這種基團化學切割,恢復3端粘性,繼續聚合第二個核苷酸。如此循環,直到每條模板序列都完全被聚合為雙鏈。統計每輪收集到的熒光信號,就可得知每個模板DNA片段的序列。

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4.?????? 數據分析

自動讀取堿基,數據被轉移到自動分析通道進行二次分析。

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