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動物品種

SD大鼠

動物性別

雌雄均可

動物周齡

6-8周

造模方法

1.  造模手術(shù)前2 h腹腔注射青霉素鈉2×105 U以抗炎。

2.  麻醉、消毒、固定。

3.  大鼠胸椎T10節(jié)段定位：觸及大鼠背部，找到胸椎最高點(diǎn)，往上數(shù)3個棘突對應(yīng)的椎體位置即為胸椎T10節(jié)段。

4.  在T9~11節(jié)段對應(yīng)背部行正中直切口，止血鉗鈍性分離開口皮膚與肌肉層之間的黏膜。

5.  輔助固定鉤拉開兩側(cè)皮膚，充分暴露手術(shù)區(qū)肌肉視野，眼科剪于中線（棘突邊緣）兩側(cè)肌肉行直切口。如果有少量出血，使用棉簽清潔手術(shù)區(qū)，眼科剪剪掉T9~11節(jié)段區(qū)域棘突及其他少量多余肌肉組織，充分暴露T9~11節(jié)段椎板。

6.  去除兩側(cè)關(guān)節(jié)突，直接暴露直徑約為0.5cm圓形區(qū)域的脊髓背側(cè)，注意暴露范圍必須大于選用的玻璃管直徑，不留骨突，以防止重物自由落下時被周圍組織遮擋。  

7.  在暴露的硬膜表面放置一彎曲度與脊髓表面一致的0.5cm×0.3cm大小的弧形塑料墊片（紗布）

8.  將一根內(nèi)徑剛好能夠容納并允許金屬棒自由滑動的玻璃導(dǎo)管豎直固定在滴定臺蝴蝶夾上，再調(diào)整使玻璃導(dǎo)管對正已放置在脊髓背側(cè)的墊片，在垂直方向上調(diào)整玻璃管高度。

9.  別克針（直徑2.5mm、長11.2cm、重10 g的圓柱狀金屬棒）沿玻璃導(dǎo)管在墊片正上方2.5cm高度處做自由落體運(yùn)動，撞擊在大鼠脊髓背側(cè)的墊片上，致傷能量25 gcf。

10.  將墊片和克氏針迅速移開后觀察大鼠的心跳和呼吸無異常。

11.  依次縫合肌肉、筋膜和皮膚，并用碘伏消毒切口及周圍。在傷口周邊撒上青霉素粉劑以抗感染。

成模鑒定

1.  撞擊后見大鼠軀體顫抖，鼠尾痙攣性擺動，雙下肢迅速回縮撲動后癱瘓，肉眼下見脊髓硬膜下血腫形成，假手術(shù)組大鼠只行棘突和椎板切除術(shù)，而不對其行SCI造模

2.  BBB運(yùn)動功能評分法：觀察期為4min，在125cm×125cm空間內(nèi)進(jìn)行，采用三人盲法進(jìn)行評分，評分前對其進(jìn)行培訓(xùn)使其詳細(xì)掌握評分細(xì)則及標(biāo)準(zhǔn)，三人在同一時間獨(dú)立觀察大鼠雙后肢的運(yùn)動功能并記錄進(jìn)行評分，最后取三個評分中最低值作為功能評分。 

3.  Rivlin斜板試驗(yàn)：采用改良Rivlin方法，用一預(yù)先粘貼好3mm厚橡膠墊的長方形木板作為斜板，斜板可通過與底板連接的鉸鏈進(jìn)行旋轉(zhuǎn)來調(diào)節(jié)斜板傾斜的角度。將大鼠置于斜板之上， 使其頭部向前，身體長軸線垂直于斜板的縱軸。檢測從水平位置(0°)開始，每次使斜板旋轉(zhuǎn)升高5°，逐漸加大斜板與水平面問的角度，記錄大鼠能夠停留5秒的最大角度為其功能角度值。正常大鼠維持身體停留5秒時，斜板的傾斜角度大約為73° 

4.  HE染色

造模周期

3d

后續(xù)檢測指標(biāo)建議

仔細(xì)游離并完整取出傷段及頭尾段共1.0cm的脊髓組織，放入預(yù)盛有4％多聚甲醛的離心管中固定24小時，HE染色后光鏡觀察脊髓損傷區(qū)及鄰近部位的病理變化。

注意事項(xiàng)

1.  由于術(shù)后大鼠體溫較低，應(yīng)將其放在取暖器旁邊以保持體溫，但也要把握好距離、防止溫度過高，可以將自己的手放在大鼠的位置感覺溫度是否合適。

2.  給大鼠進(jìn)行排尿護(hù)理時，以手指觸摸找到充盈的膀胱，然后按住膀胱底，自上而下擠壓，使尿排出。擠壓時耐心輕柔，切忌粗暴用力。如擠出困難，可用溫水適當(dāng)刺激膀胱區(qū)及外生殖器。防止對尿道區(qū)及外生殖器進(jìn)行不適當(dāng)?shù)臋C(jī)械刺激，以免尿道水腫及外生殖器水腫翻出，定期清潔。

3.  進(jìn)行BBB評分前，要將大鼠尿液排凈，以免影響實(shí)驗(yàn)，評分時需認(rèn)真、仔細(xì)觀察大鼠的四肢的行走情況并記錄。BBB評分可歸結(jié)為：0～7分，主要看關(guān)節(jié)動否，有幾個關(guān)節(jié)動；8～14分，看腳掌能否著地，著地后能否運(yùn)動，運(yùn)動是否協(xié)調(diào)；15～18分，看腳尖能否抓地，腳尖與前進(jìn)方向是否一致，前后肢運(yùn)動是否協(xié)調(diào)；19～21分，看運(yùn)動時軀干穩(wěn)不穩(wěn)定，尾巴翹不翹。

4.  術(shù)后護(hù)理：術(shù)后將動物分籠飼養(yǎng)，自然光照、通風(fēng)；每天更換清潔、干燥的墊料始終保持干燥；嚴(yán)密觀察動物精神狀態(tài)、飲食、排尿排便、有無肢體水腫和壓傷、有無泌尿系統(tǒng)血性分泌物等情況，給予人工排尿每日3次；腹腔注射青霉素10萬U/次，每日2次；防止自殘；防止腸梗阻。

5.  模型嚴(yán)重程度可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求調(diào)整撞擊次數(shù)、撞擊高度，建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。