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免疫熒光/細胞功能/實驗/免疫/熒光/細胞-承諾客觀真實,實驗過程可追溯

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產(chǎn)品名稱: 免疫熒光/細胞功能/實驗/免疫/熒光/細胞-承諾客觀真實,實驗過程可追溯

英文名稱: Immunofluorescence

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免疫熒光技術(shù)是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術(shù)的基礎上建立起來的一項技術(shù)。它是根據(jù)抗原抗體反應的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位,以及利用定量技術(shù)(比如流式細胞儀)測定含量。

? ? ? ?免疫熒光實驗的主要步驟包括細胞片制備、固定及通透(或稱為透化)、封閉、抗體孵育及熒光檢測等。細胞片制備(通俗的說法是細胞爬片)是免疫熒光實驗的第一步,細胞片的質(zhì)量對實驗的成敗至關(guān)重要,原因很簡單,如果發(fā)生細胞掉片,一切都無從談起。這一步關(guān)鍵的是玻片(Slides or Coverslips)的處理以及細胞的活力,有人根據(jù)成功經(jīng)驗總結(jié)出許多有益的細節(jié)或小竅門,非常值得借鑒。固定和通透步驟最重要的是根據(jù)所研究抗原的性質(zhì)選擇適當?shù)墓潭ǚ椒ǎ线m的固定劑和固定程序?qū)τ讷@得好的實驗結(jié)果是非常重要的。免疫熒光中的封閉和抗體孵育與其它方法(如ELISA或Western Blot)中的相同步驟是類似的,最重要的區(qū)別在于免疫熒光實驗中要用到熒光抗體,因此必須謹記避光操作,此外抗體濃度的選擇可能更加關(guān)鍵。最后需要注意的是,標記好熒光的細胞片應盡早觀察,或者用封片劑封片后在4℃或-20℃避光保存,以免因標記蛋白解離或熒光減弱而影響實驗結(jié)果。

? ? ? ?由于操作步驟比較多,同時在分析結(jié)果時無法像WB那樣可以根據(jù)分子量的大小區(qū)分非特異性識別,所以要得到一個完美的免疫熒光實驗結(jié)果,除了需要高質(zhì)量的抗體,以及對實驗條件進行反復優(yōu)化外,還必須設立嚴謹?shù)膶嶒瀸φ铡?傊庖邿晒鈱嶒瀼募毎麡悠诽幚怼⒐潭ā⒎忾]、抗體孵育到最后的封片及觀察拍照,每步都非常關(guān)鍵,需要嚴格控制實驗流程中每個步驟的質(zhì)量,才能最終達到你的實驗目的。