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大鼠組織多肽抗原 ELISA北京檢測/大鼠TPA ELISA試劑盒說明書

操作步驟
實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進行檢測。

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室內質控血清的制備：
◎收集陽性血清(無明顯溶血、黃膽、脂肪血和污染血清,到一定量（夠本室使用3-6個月的量）；
◎傳染性病毒陽性需經56℃、10小時滅活后使用；
◎過濾，除纖維沉淀物；
◎稀釋，用正常人血清或10%小牛血清PBS溶液稀釋；
◎測定值，與定值參考品進行對比、求值，一般定在Cut Off值附近的陽性值；
◎分裝小瓶（每日用量），加蓋、貼簽，-20℃凍存備用。
不使用質控血清的室內質控
◎操作過程的質量控制（分析前、后質控）
◎試劑盒陰陽性對照或標準濃度系列。
陰對≤0.05 陽對-陰對>0.8 標準濃度落在2s
陽對 > 0.80 ; 范圍內
◎病人資料統計，連續觀察病人檢測結果的資料，并分析該病人其他化驗結果的關系。
質量保證
（Quality Aprovment，QA）
◎質量保證的核心內容是室間質評。室間質評是一種回顧性評價，主要控制試驗結果的準確性，也是某些定量試驗量值朔源。

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