產品說明
唾液酸是N或O取代的含九碳的酸性糖衍生物的總稱。這類糖中最常見的一種是N-乙酰神經氨酸(NANA)。唾液酸廣泛分布在哺乳動物的組織和體液包括血清之中。唾液酸寡糖具有抗病毒的能力，它還能夠影響血液的凝固和膽固醇水平。在體液中唾液酸濃度也是診斷癌癥的重要指標。簡單、直接的唾液酸含量檢測手段是最為理想的。本公司生產的唾液酸測試法采用了改進的沃倫方法，即唾液酸被氧化成酰基丙酮酸，再與巴比妥酸反應生成粉紅色產物。其顏色強度(549?nm)?或熒光強度(lem/ex?=?585/555?nm）與樣品中的唾液酸濃度成正比。
產品特點
靈敏、準確：只需60mL?樣本，測試范圍：比色法5?~1000?mM，熒光法?0.5?~?100?mM。
產品用途
直接檢測血清、血漿、唾液、牛奶和生物制劑中唾液酸的含量。
試劑盒組成(96孔板供100?份檢測)
顯色劑:??????6?mL??????
氧化試劑:?10?mL
10%?TCA:?5?mL?
水解試劑:?10?mL
DMSO:????12?mL??
標準品:?500?mL?10?mM?唾液酸
儲存條件：室溫運輸，標準品在-20°C下保存，其余試劑在室溫下保存。保質期3個月。
預防措施：本產品僅供研究用。使用過程中應嚴格遵循實驗安全措施。
96孔板比色法測試步驟
1.?標準：使用前，須將試劑放置至室溫。將25?mL?標準和?225?mL?蒸餾水混勻，配成1000mM唾液酸標準。按照下表比例，用蒸餾水稀釋標準品。
No
標準品?+?dH2O
Vol?(mL)
唾液酸(mM)
1
?????100mL?+?????0mL
100
1000
2
???????60mL?+???40mL
100
??600
3
???????30mL?+???70mL
100
??300
4
?????????0mL?+?100mL
100
??????0
?
取4支做標記好的Eppendorf試劑管，將20mL?標準分別加入到每個管中，再分別加入?5?mL?10%?TCA。
?2.?樣品處理：為測定唾液酸總含量(TSA)，需按如下方式將樣品水解：將20?mL?樣品,?40?mL?蒸餾水和?40?mL水解試劑在試劑管中混勻。在80°C下加熱?60分鐘，冷卻后加入25?mL?10%?TCA,?遙勻并離心10分鐘(14000?rpm)，取上清液?25?mL?加到試管中并標記為?“TSA”。
????為測定游離的唾液酸含量(FSA),?直接將40mL?樣品和?10mL?10%?TCA混勻，離心10分鐘(14000?rpm)，取上清液?25?mL?加到試管中并標記為?“FSA”。
3.?氧化：按如下比例為每個試管配備工作試劑：將15?mL水解試劑、50?mL?蒸餾水和?65?mL?氧化試劑混勻。在每個試管中分別加入125?mL?工作試劑，在室溫下靜置?60?分鐘。
4.?顯色反應：在每個試管中加入?50?mL?顯色劑，混勻并在100°C
加熱10分鐘。冷卻?5-10?分鐘后，再在每個試管中加入?100mL?DMSO?；靹蚝笠?/FONT>14,000?rpm的速度離心5分鐘。取透明平底96孔板，將?250?mL?上清液加到不同孔中。
5.?在549?nm?(540-555nm)處讀取吸光度。
96孔板熒光法測試步驟
熒光法比比色法敏感十倍。用蒸餾水配備?0,?30,?60?和100?mM?唾液酸標準?。
熒光法和比色法步驟基本相同，但熒光法中，將最終反應的混合物加入黑色平底96孔板。在lex?=?555?nm?和?lem?=?585?nm處讀取熒光強度。
濃度計算
用標準品的吸光度或熒光強度值減去空白值(4號)，對標準品濃度作圖并得出斜率。樣本的唾液酸濃度計算如下：
R樣品和R對照?分別是樣品和蒸餾水對照(4號)的吸光度或熒光強度值。n是樣品的稀釋系數，TSA?測試中?n?=?5?，FSA?測試中?n?=?1?。
注:?若計算出樣本的唾液酸濃度高于測試范值，需用水稀釋樣本并重復檢測，結果需乘稀釋系數(n)。
單位換算：?1000?mM?NANA相當于30.9?mg/dL或309?ppm。
實驗必需品(未提供)
吸液用儀器，離心管，離心分離機，透明平底96孔板，加熱塊，黑色96孔板，吸光率閱讀器。