細胞狀態好壞直接影響后期實驗結果，長期統計培養中遇到的問題習慣養成，對用戶及公司雙方所需都有好趨勢并積極意義。

國內庫可用免疫類暫列上海庫協和庫：

-----------------淋巴細胞類

小鼠T淋巴細胞瘤細胞；Cyc-Tag(S49) 人B淋巴細胞瘤細胞；RAMOS 人B淋巴細胞瘤細胞；RAMOS(RA.1) 人急性T淋巴細胞白血病細胞；Jurkat, Clone E6-1 急性T淋巴細胞白血病細胞；TALL-104 人T淋巴細胞白血病細胞；HuT 78 小鼠淋巴細胞白血??；L1210 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞；SH2 小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞；SH3 小鼠T淋巴細胞；Cl.Ly1+2-/9 人急性T淋巴細胞性白血病細胞；I 2.1(CRL-2572) 人急性T淋巴細胞白血病細胞；Jurkat 人急性T淋巴細胞白血病細胞；JurkatE6-1 人B淋巴細胞母細胞；NTCC721.221 小鼠T淋巴細胞；CTLL-2 [CTLL2] 小鼠B淋巴細胞；WEHI 231 EB病毒轉化的絨猴淋巴細胞；B95-8 中國倉鼠X小鼠B淋巴細胞雜交瘤；MR1 [derivative of HB-11048] 人T淋巴細胞白血病細胞；6T-CEM 人T淋巴細胞白血病細胞；HuT 78 人T淋巴細胞白血病細胞；A3 人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞；CCRF-CEM [CCRF CEM] 人急性非B非T淋巴細胞性白血病細胞；Reh 人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞；CCRF-CEM [CCRF CEM] 人急性淋巴細胞白血病細胞；CEM/C1 人淋巴細胞；1301

----------------- 白血病類

人急性早幼粒白血病細胞；HL-60 人慢性髓系白血病細胞；K562 小鼠紅白血病細胞；MEL 人急性單核細胞白血病細胞；THP-1 人巨細胞白血病細胞株；Mo7e 人紅系白血病細胞；TF-1 人類原巨核細胞型白血病細胞；UT-7 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞；RAW 264.7 [RAW264.7

大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞；RBL-1 615小鼠T細胞性白血病瘤株；L7712 615小鼠T細胞性白血病瘤株；L7912 615小鼠網織細胞性白血病瘤株；L615 人漿細胞白血病細胞；NCI-H929 人成巨核細胞白血病細胞；MEG-01 人外周血嗜堿性白血病細胞；KU812 人T淋巴細胞白血病細胞；6T-CEM 人巨核細胞白血病細胞；Dami 人紅白細胞白血病細胞；HEL 人成巨核細胞白血病細胞；MEG-01 人T淋巴細胞白血病細胞；A3 急性髓系細胞白血病細胞；KG-1 人Ph+急淋白血病細胞系；SUP-B15 人紅白血病細胞；Kasumi-1 人T淋巴細胞白血病細胞；HuT 78 人急性單核細胞白血病單核細胞；AML-193 人急性淋巴細胞白血病細胞；CEM/C1 人急性淋巴母細胞性白血病細胞；MOLT-4 小鼠網織細胞性白血病細胞；L615

大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞；RBL-2H3

公司來源細胞暫不在后期討論范圍內，國產血清暫不在討論范圍，培養中遇到的問題，請詳細描述處理細胞手法，細節，廠家，貨號。凍存步驟，復蘇步驟，細胞問題描述。為及時回復用戶，最好回復我司郵箱。procyte@126.com

常見問題建議：專用培養基1640，胰酶濃度0.05（成團成片建議離心后鋪板消化，短時間內再次團聚厲害的，可來信溝通我司推薦步驟，實驗驗證中），血清，根據自己實驗室能力，用到最好。

懸浮轉染：很多技術老師都認為是個難題，丁香園有老師介紹很久前的辦法逆轉錄病毒成功率高，到目前成功案例不多，各位老師可查相關文獻，目前認為上述團聚厲害也是轉染關鍵。雖然目前有幾種團聚解決辦法，我們也在驗證評測中，歡迎與各位老師交流細節經驗。

凍存步驟：建議頭天配液，第二天用。

復蘇：血清建議濃度調高，凍存步驟如無問題，細胞幾周后可爬出，

免疫細胞共聚焦：

通過對懸浮轉染實踐并統計中，我司增強細胞貼壁試劑很快時間可將細胞馴化成貼壁細胞，成像優勢很大，文獻有提到黏連蛋白可用在該實驗中，該試劑保存要求高，實施難度高，成本高，成功率低，重復難度大。歡迎各位老師有這方面實驗的，來信溝通交流。

實驗驗證中：JURKAT質粒轉染，鼠淋巴細胞轉染，這類細胞免疫保護要有老師有興趣或有資料，我們非常有興趣了解并多家實驗室驗證。實驗結果共享。

該類細胞研究北京地區同行，要長期研究這類細胞，如能互信互利雙方達成友好合作的實驗室，試劑篩選比對統計，我司提供試用，協助用戶評測并共享統計資料，篩選平穩試劑平臺，或后期課題合作。經過十年生產銷售，我司有些不錯的細胞培養方面各種資源。

免疫血液類研究分子及蛋白方面研究實驗室可來信題目標明。我們上門拜訪。

國內細胞狀態統計一些小建議-血清

高質量的血清：應該是細胞出現問題能解決問題，并能持續保證質量一貫性。

與很多老師意見：其他細胞都能養活，就這個細胞養不好。正好相反，建議評審條件正好相反。如能長期關注這種問題，篩選出的血清質量結果也是最可靠的，就像我們出現問題能想到的那款血清，為啥這款血清能夠完成幾乎所有問題解決，幾十年質量一致性，批間差幾乎為零。這種血清才是高質量血清。

歡迎與常年從事細胞質量要求高的實驗室一起解決各種問題，目前技術、試劑、設計、方法已相對成熟。國內從從細胞建系開始的技術試驗已經非常成熟了，我司目前目前跟蹤統計的原代細胞建系思路設計及實驗已經有幾年了，真正的成熟還要做很多的工作。我司十年的基礎實踐統計，歡迎您的參與與提攜。

20211015：我司在該類細胞轉染逆轉錄病毒技術上有些些突破，有興趣老師可來信注明，如有時間重復我們試劑方法實驗，要求，細胞來源明確，生長順利（描述生長狀態特性，細胞圖片）。進口試劑耗材，狀態一定要好，給出血清圖片。經簽保密協議公司授權后，可共享，所用試劑全部自有研發生產。也歡迎國內轉染試劑有研發團隊深入合作。高通量轉染我司一直在做相關技術儲備。

20211101：巨噬相關培養問題（初稿已總結好，案例還不多）：原代建系方面開始統計相關，有需要老師可來信注明，進口試劑耗材（國產試劑耗材用戶等統計成熟了會公布）-兩年培養經驗-告知實驗室名稱（這樣溝通較準確）-轉染相關請注明，我們已有些技術突破，還在驗證中。

20220622關于胰酶應用與團聚。團聚是這類細胞正?，F象，特別是傳代后容易團聚，按臨床培養方法，不棄液培養，后期收獲前細胞，細胞會成單個狀態。該方法后面要繼續傳代培養，前期應該還會團聚。也說明上清回輸方法可行性。通過對團聚類細胞統計（包括原代無血清類）也說明細胞培養過程中某些營養缺乏。胰酶用途目的是：轉染前、凍存前我們把團聚細胞通過化學作用使細胞成單個目的，轉染前、凍存前我們叫優化細胞狀態，為使后面實驗更加順利，單個在轉染前凍存前消化開，可與團聚狀態做比較實驗，單個細胞狀態后續實驗效果會更好。

20221109 淋巴瘤類免疫細胞經過國內實驗室長期培養后，有些習慣性、技術、試劑層面引起的細胞復蘇恢復困難問題，經過十幾年統計，給些建議參考，具體問題可描述上下操作步驟，保種級別試劑，血清加倍后，完全培養基翻倍加入培養瓶，放置培養箱，一周兩周不動都可以，根據加培養基代謝情況換液，保種試劑建議在平行曲線比較培養中測試下，不換液，看下細胞增殖情況，我們理解的保種級別試劑，主要是血清，在后面一兩天還在增殖中。這種評測過的血清，上這類難養細胞比較穩妥。這個實驗堆后面難養細胞培養恢復有意義。案例用戶新手，習慣性復蘇培養已放棄，上述實施后救助成功。

20230524該類細胞轉染統計參考：金標準推薦LIPO3000-反向法（具體問題可討論），PEI-反向法（理論上是可行的，需更多理由案例可討論）我司無PEI相關產品已推出，預實驗不理想（減少毒性目的還比較理想，轉染效果不理想，進一步提升研發中，有需研發試用機構來信告知）歡迎國內研發機構留下聯系方式。細工在該類細胞培養統計中，技術儲備充足，該類培養中細胞團聚特性，與類器官，干細胞，懸浮皿團聚有類似特點，相關解離產品也在統計中，也是轉染中解決團聚后，提升細胞質量，提高轉染效率較關鍵因素。

關鍵詞：培養中解離產品（反向馴化），無酶消化產品，優化酶消化產品（細胞工廠已有多年工業應用），磷酸鈣轉染優化產品，無鈣培養基應用等，含硒培養基開發。

免疫細胞轉染細工要點參考
關鍵點解決細胞團聚，轉然前我們推薦Optimized Trypsin優勢不是一般的大，解決成團是免疫細胞關鍵點，用這款一沒理由就是對細胞無損特點，膜無損，具體介紹可看產品介紹，通過六年以上案例統計。
關鍵點反轉法，是目前我們統計大品牌轉染得效果不錯后推薦，下面有相關廠家及貨號，該類產品我司輔助錨著是促貼壁試劑輔助，這個產品開發應用五年了（工業病毒生產用，293類）及免疫細胞共聚焦也可以，下面有連接說明說明。
關鍵點提高病毒滴度，參考下面介紹增強貼壁試劑鏈接，提高病毒滴度很關鍵，目前腦膠質溶瘤相關用戶可能已到中式（訂貨量上判斷，五年應用，這部分不討論用戶案例，技術部分可以）
關鍵點突破理由兩點相關輔助簡單介紹
凍存復蘇優化，DMSO方法，提高活率細胞量與質量，目前臨床合作實驗室PBMC活率80%保守介紹，目標能到盡量在高些，需驗證建議用貼壁試劑案例293驗證比較穩妥，很多細節要溝通，能做到我們產不多參數，應用免疫細胞應該容易很多。
試劑耗材我們指定，進口耗材，及細工試劑。
巨噬培養生長分化控制，膜提取，轉染方面配套該細胞目前只在理論階段，實施還要很長時間。有涉及轉染部分，在溝通討論。
免疫類原代培養、建系、類器官等，有相關研究可來信注明，更多資料發您，郵件聯系。