質粒小量提取試劑盒II(250preps)
產品名稱： 質粒小量提取試劑盒II(250preps)
英文名稱： Plasmid mini kit II
產品編號： PD1213-03
產品價格： 0
產品產地： 美國圣地亞哥
品牌商標： Biomiga
更新時間： null
使用范圍： null
Biomiga（中國）
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- 郵編 : 201109
- 所在區域 : 上海
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- 郵箱 : tech@biomiga.com.cn
試劑盒組分：
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Catalog# |
PD1213-02 |
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Preps |
100 |
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ezBind Columns |
100 |
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Buffer A1 |
50?mL |
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Buffer B1 |
50?mL |
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Buffer N1 |
60?mL |
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Buffer KB |
60?mL |
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DNA Wash Buffer* |
2?x?15 mL |
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Elution Buffer |
30 mL |
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RNase A (20 mg/mL) |
5?mg
(250 μL) |
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User Manual |
1 |
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保存條件：
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RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
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注意事項：
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- 使用前請將適量乙醇加入DNA Wash Buffer，令乙醇終濃度為80%
- 純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同體積的Wash Buffer和Elution Buffer
- 若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。
- 若用于提取1-4 mL的菌落，請將Buffer A1, B1, N1的量降低至250 μL, 250 μL 及 350 μL，DNA wash Buffer及Elution Buffer的量不變。
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操作步驟：
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- 接種新鮮的單個菌落到5-12 mL的LB培養基（含適量抗生素），37oC震蕩培養14-16小時（勿超過16小時）。室溫下10,000 rpm離心1分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入450 μL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩充分懸浮細菌細胞。
- 加入 450 μL Buffer B1, 輕輕地反轉多次至溶液充分混勻，室溫靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
- 加入550 μL Buffer N1, 立即反轉多次，至溶液充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。
- 將離心管轉至高速離心機，在室溫下13,000 rpm離心10分鐘（若上清中有白色沉淀，可再次離心）。
- 小心吸取700 μL離心后的上清液至帶有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“7”至全部上清離心過DNA柱。
- 可選: 向DNA柱中加入 500 μL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入650 μL DNA Wash Buffer（確保已加入無水乙醇），室溫下，13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“8”。
- 將離心柱放回高速離心機中，13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘，以徹底去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉至一個新的1.5 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入100~150 μL（體積>100 μL）的ddH2O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置2分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質粒DNA。將洗脫液再加到柱的中間，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質粒DNA。
操作流程：
