Caspase-4活性測定試劑盒 20T-細胞生物學檢測-試劑-生物在線
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Caspase-4活性測定試劑盒 20T

Caspase-4活性測定試劑盒 20T

商家詢價

產品名稱： Caspase-4活性測定試劑盒 20T

英文名稱： Caspase-4 activity test kit

產品編號： BC3840

產品價格： 0

產品產地： 北京

品牌商標： Solarbio

更新時間： 2026-04-01T14:08:12

使用范圍： null

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Caspase-4活性測定試劑盒 20T

Caspase-4活性測定試劑盒 20T

品牌：Solarbio | 貨號：BC3840

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商品貨號： 商品品牌： 規格 基本售價： 選擇規格
BC3840-20T Solarbio 20T 624.00元
BC3840-50T Solarbio 50T 1104.00元
BC3840-100T Solarbio 100T 1904.00元
保存：試劑常溫運輸，到達后按要求儲存，1 年內穩定。

產品內容： （所示為 100 次檢測，50 次檢測試劑量減半）
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1. 裂解緩沖液 ?? 4 oC 保存；
2. 反應緩沖液 ?? 4 oC 保存；
3. 底物 ? ? ? ? ? ? ? ? -20 oC 避光保存；
4. 10 mM pNA 標準品 ?? -20 oC 避光保存。
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產品介紹：
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Caspase 是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含 10 多個成員。Caspase-4 可以和 Apaf-1 相互 作用，并參與細胞色素 c 導致的 Caspase-3 激活，也可以和 caspase-14 相互作用。 Caspase-4 特異水解多肽底物 LEVD-pNA (Leu-Glu-Val-Asp-p-nitroanilide)，釋放的游離**苯胺 pNA 在 405 nm 有最大吸光度。采用可見光光度比色法測定 pNA 而得到 Caspase 活性。適用于檢測 哺乳動物組織、細胞 Caspase-4 活性。
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所需儀器：
可見光分光光度計配 100μl 比色杯，或酶標儀。最佳波長 405 nm，也可測 OD400~450 nm 但靈 敏度略降。
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操作步驟：
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一、組織細胞準備：
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Caspase活性測定值低，最常見原因是未發生凋亡或細胞量太少，其次是觀測時間點不恰當。 誘導凋亡時，并非劑量越大時間越長Caspase活性就越高。可設置不同劑量和時間點如0、2、4、8、16、24小時，以檢測最佳的觀察點。通常2×107細胞或2mg組織裂解于1ml可產生1~3mg/ml蛋白。初次測定時，單個測定反應可加~200μg蛋白物對應于2×106細胞或2個孔的6孔板細胞。最少，單個測定 反應需加20μg蛋白對應于2×105個細胞或2個孔的12孔板細胞。勿用絲氨酸蛋白酶抑制劑如E-64和 leupeptin以免抑制Caspase活性。
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1、（1）細胞裂解：1000g 5分鐘收集細胞，吸盡上清。每2~10×106細胞加50~100μl裂解液震蕩裂解，冰浴10分鐘，再次震蕩。
(2) 組織裂解：3~10mg組織加100 μl裂解液放入小型玻璃勻漿器，上下勻漿30次。轉移勻漿液于離心管。
2、4 oC 12,000g 10分鐘，取上清測定，或-70 oC保存。
3、蛋白定量：用Bradford法測定蛋白濃度。裂解液含還原劑不宜采用BCA法。應使蛋白濃度達到1-3 mg/ml，相當于每10 μl待測樣品含10-30μg蛋白，否則應增加細胞用量。
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二、測定pNA標準曲線：
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1. 用反應緩沖液稀釋 10mM pNA 標準品為 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125μM。設置不加 pNA 的零管。
2. 每一濃度取 100 μl 加入 96 孔板或 100μl 比色杯，測定 405nm 吸光度 OD 值。
3. 每一濃度標準管 OD405 值為 x 軸，對應的 pNA 濃度為 y 軸，用 Excel 制作 pNA 濃對 OD405 值的標準曲線。
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三、樣品測定操作：
1. 按下表設置96孔板反應體系。底物最后加入以使各管反應起始時間相同。設置不加樣品的空白對 照管。酶活力不足或過高，可增加或減少樣品。
2. 蓋緊96孔板蓋子并用封口膜密封。37 oC反應2小時，肉眼可見顏色變黃時的OD405值約為0.2，此 時即可測定。顏色變化不明顯可延長反應或過夜，但酶活性較強時，孵育時間過長將導致反應失去 線性關系。
3. 樣品管OD405減去空白對照OD405，為樣品Caspase水解底物產生的pNA吸光度。根據標準曲線計算其含量，并以蛋白濃度校正之。
4. 測得的Caspase酶活性表示方法有兩種。
(1) Caspase活性增加的百分比：100% ×實驗處理組OD / 實 驗對照組OD，簡單而可靠。(2)樣品Caspase酶活力單位/mg protein，精確但計算較復雜，參見說明。
? ? ? ? 反應體系參考表 (允許適當調整樣品加樣量)
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產品說明：
1. Caspase酶活力單位定義：參考Chemicon公司One unit is the amount of enzyme that will cleave 1.0 nmol of the colorimetric pNA-substrate per hour at 37 oC under saturated substrate concentrations。即當底物飽和時,一個Caspase酶活力單位定義為37 oC 1小時水解pNA底物，產生1nmol游離pNA。根據pNA 標準曲線和樣品OD值，可計算出Caspase酶活力單位。
2. 除了處理組外，可設置陽性凋亡誘導劑組，陰性實驗對照可包括不具有凋亡誘導作用的試劑(如 果能得到)處理組、溶劑對照組、或凋亡誘導零時間點。

參考文獻：
1. Cohen GM. Caspases: the executioners of apoptosis. Biochem J. 326, 1-16 (1997).
2. Porter AG and Janicke RU. Emerging role of caspase-3 in apoptosis. Cell Death Differ. 6, 99-104 (1999)
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