Caspase-4活性測定試劑盒 20T-細(xì)胞生物學(xué)檢測-試劑-生物在線

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Caspase-4活性測定試劑盒 20T

Caspase-4活性測定試劑盒 20T

商家詢價

產(chǎn)品名稱： Caspase-4活性測定試劑盒 20T

英文名稱： Caspase-4 activity test kit

產(chǎn)品編號： BC3840

產(chǎn)品價格： 0

產(chǎn)品產(chǎn)地： 北京

品牌商標(biāo)： Solarbio

更新時間： 2026-04-01T14:08:12

使用范圍： null

北京索萊寶科技有限公司
  • 聯(lián)系人 : 索萊寶-龔思雨
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Caspase-4活性測定試劑盒 20T

Caspase-4活性測定試劑盒 20T

品牌：Solarbio | 貨號：BC3840

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商品貨號： 商品品牌： 規(guī)格 基本售價： 選擇規(guī)格
BC3840-20T Solarbio 20T 624.00元
BC3840-50T Solarbio 50T 1104.00元
BC3840-100T Solarbio 100T 1904.00元
保存：試劑常溫運(yùn)輸，到達(dá)后按要求儲存，1 年內(nèi)穩(wěn)定。

產(chǎn)品內(nèi)容： （所示為 100 次檢測，50 次檢測試劑量減半）
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1. 裂解緩沖液 ?? 4 oC 保存；
2. 反應(yīng)緩沖液 ?? 4 oC 保存；
3. 底物 ? ? ? ? ? ? ? ? -20 oC 避光保存；
4. 10 mM pNA 標(biāo)準(zhǔn)品 ?? -20 oC 避光保存。
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產(chǎn)品介紹：
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Caspase 是參與細(xì)胞凋亡過程的蛋白酶家族，包含 10 多個成員。Caspase-4 可以和 Apaf-1 相互 作用，并參與細(xì)胞色素 c 導(dǎo)致的 Caspase-3 激活，也可以和 caspase-14 相互作用。 Caspase-4 特異水解多肽底物 LEVD-pNA (Leu-Glu-Val-Asp-p-nitroanilide)，釋放的游離**苯胺 pNA 在 405 nm 有最大吸光度。采用可見光光度比色法測定 pNA 而得到 Caspase 活性。適用于檢測 哺乳動物組織、細(xì)胞 Caspase-4 活性。
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所需儀器：
可見光分光光度計配 100μl 比色杯，或酶標(biāo)儀。最佳波長 405 nm，也可測 OD400~450 nm 但靈 敏度略降。
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操作步驟：
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一、組織細(xì)胞準(zhǔn)備：
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Caspase活性測定值低，最常見原因是未發(fā)生凋亡或細(xì)胞量太少，其次是觀測時間點不恰當(dāng)。 誘導(dǎo)凋亡時，并非劑量越大時間越長Caspase活性就越高。可設(shè)置不同劑量和時間點如0、2、4、8、16、24小時，以檢測最佳的觀察點。通常2×107細(xì)胞或2mg組織裂解于1ml可產(chǎn)生1~3mg/ml蛋白。初次測定時，單個測定反應(yīng)可加~200μg蛋白物對應(yīng)于2×106細(xì)胞或2個孔的6孔板細(xì)胞。最少，單個測定 反應(yīng)需加20μg蛋白對應(yīng)于2×105個細(xì)胞或2個孔的12孔板細(xì)胞。勿用絲氨酸蛋白酶抑制劑如E-64和 leupeptin以免抑制Caspase活性。
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1、（1）細(xì)胞裂解：1000g 5分鐘收集細(xì)胞，吸盡上清。每2~10×106細(xì)胞加50~100μl裂解液震蕩裂解，冰浴10分鐘，再次震蕩。
(2) 組織裂解：3~10mg組織加100 μl裂解液放入小型玻璃勻漿器，上下勻漿30次。轉(zhuǎn)移勻漿液于離心管。
2、4 oC 12,000g 10分鐘，取上清測定，或-70 oC保存。
3、蛋白定量：用Bradford法測定蛋白濃度。裂解液含還原劑不宜采用BCA法。應(yīng)使蛋白濃度達(dá)到1-3 mg/ml，相當(dāng)于每10 μl待測樣品含10-30μg蛋白，否則應(yīng)增加細(xì)胞用量。
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二、測定pNA標(biāo)準(zhǔn)曲線：
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1. 用反應(yīng)緩沖液稀釋 10mM pNA 標(biāo)準(zhǔn)品為 200, 100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.125μM。設(shè)置不加 pNA 的零管。
2. 每一濃度取 100 μl 加入 96 孔板或 100μl 比色杯，測定 405nm 吸光度 OD 值。
3. 每一濃度標(biāo)準(zhǔn)管 OD405 值為 x 軸，對應(yīng)的 pNA 濃度為 y 軸，用 Excel 制作 pNA 濃對 OD405 值的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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三、樣品測定操作：
1. 按下表設(shè)置96孔板反應(yīng)體系。底物最后加入以使各管反應(yīng)起始時間相同。設(shè)置不加樣品的空白對 照管。酶活力不足或過高，可增加或減少樣品。
2. 蓋緊96孔板蓋子并用封口膜密封。37 oC反應(yīng)2小時，肉眼可見顏色變黃時的OD405值約為0.2，此 時即可測定。顏色變化不明顯可延長反應(yīng)或過夜，但酶活性較強(qiáng)時，孵育時間過長將導(dǎo)致反應(yīng)失去 線性關(guān)系。
3. 樣品管OD405減去空白對照OD405，為樣品Caspase水解底物產(chǎn)生的pNA吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算其含量，并以蛋白濃度校正之。
4. 測得的Caspase酶活性表示方法有兩種。
(1) Caspase活性增加的百分比：100% ×實驗處理組OD / 實 驗對照組OD，簡單而可靠。(2)樣品Caspase酶活力單位/mg protein，精確但計算較復(fù)雜，參見說明。
? ? ? ? 反應(yīng)體系參考表 (允許適當(dāng)調(diào)整樣品加樣量)
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產(chǎn)品說明：
1. Caspase酶活力單位定義：參考Chemicon公司One unit is the amount of enzyme that will cleave 1.0 nmol of the colorimetric pNA-substrate per hour at 37 oC under saturated substrate concentrations。即當(dāng)?shù)?/span>物飽和時,一個Caspase酶活力單位定義為37 oC 1小時水解pNA底物，產(chǎn)生1nmol游離pNA。根據(jù)pNA 標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品OD值，可計算出Caspase酶活力單位。
2. 除了處理組外，可設(shè)置陽性凋亡誘導(dǎo)劑組，陰性實驗對照可包括不具有凋亡誘導(dǎo)作用的試劑(如 果能得到)處理組、溶劑對照組、或凋亡誘導(dǎo)零時間點。

參考文獻(xiàn)：
1. Cohen GM. Caspases: the executioners of apoptosis. Biochem J. 326, 1-16 (1997).
2. Porter AG and Janicke RU. Emerging role of caspase-3 in apoptosis. Cell Death Differ. 6, 99-104 (1999)
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