無內毒素小量質粒提取試劑盒Ⅱ(250preps)
產品名稱： 無內毒素小量質粒提取試劑盒Ⅱ(250preps)
英文名稱： EndoFree plasmid ezFlow mini kit II
產品編號： PD1222-02
產品價格： 0
產品產地： 美國圣地亞哥
品牌商標： Biomiga
更新時間： null
使用范圍： null
Biomiga（中國）
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試劑盒組分：
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Catalog # |
PD1222-02 |
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Preps |
250 |
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ezBind Columns |
250 |
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Buffer A1 |
125 mL |
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Buffer B1 |
125 mL |
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Buffer N3 |
25 mL |
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Buffer KB |
135 mL |
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Buffer RET |
250 mL |
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DNA Wash Buffer* |
54 mL |
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Endofree Elution Buffer |
30 mL |
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RNase A(20 mg/mL) |
12.5 mg (625 μL) |
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User Manual |
1 |
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保存條件：
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RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。
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注意事項：
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- 質?？截悢? 純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同體積的Wash Buffer和Endofree Elution Buffer.
- 轉化菌: 若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。
- 切勿直接取凍存的菌進行培養。
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操作簡明步驟：
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- 接種新鮮的單個菌落到3-12 mL的LB培養基 (含適量抗生素)，37oC震蕩培養14-16小時。
- 室溫下13,000? rpm 離心1分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入450 μL Buffer A1 (確保已加入RNase A) ，用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
- 加入 450 μL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。?
- 加入預冷的80 μL Buffer N3（或加入到裂解液后在冰上放置1分鐘將有利于減少蛋白漂?。? 立即反轉5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。
- 將離心管轉至高速離心機，在室溫下13,000 rpm離心10分鐘（若上清中仍有白色沉淀，可再次離心）。
- 定量吸取離心后的上清液至新的1.5 mL管中，加入1倍體積的Buffer RET, (如900 μL裂解液加入到900 μL的上清液)及400 μL的100% ethonal，充分顛倒混勻。
- 將溶液700 μL轉移至帶有收集管的DNA柱中，室溫下13,000 rpm 離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復此步驟至全部溶液轉移至DNA柱中。
- 可選: 向DNA柱中加入 500 μL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入500 μL DNA Wash Buffer(確保已加入無水乙醇)，室溫下，13,000 rpm 離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“10”。
- 將離心柱放回高速離心機中，13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘，以徹底去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉至一個新的1.5 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入50~100 μL(體積>50 μL)的Endofree Elution Buffer，室溫放置1分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質粒DNA。將離心管中的洗脫液再次加到DNA柱的正中間，室溫放置1分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，收集洗脫液到同一個離心管中。
操作流程：
