本試劑盒采用比色法測定維生素C（VC）的含量，測定原理如下：Fe3+與還原型抗壞血酸迅速作用生成Fe2+，后者與啡羅啉顯色反應，可以測定血漿中維生素C的含量。

該方法的優點包括快速簡便，重復性強，適用于適用于可測動物血清/漿、組織等的VC測定。

產品信息

組分信息

備注：

1）試劑一應用液配制：用時按照試劑一貯備液：蒸餾水=1：14 稀釋，混勻制備。

2）試劑二應用液配制：用時1支粉劑加0.36 mL的冰醋酸再加水至40 mL，溶解，2℃～8℃保存。

3）試劑三應用液配制：因較難溶解，用前2～4小時加95%酒精或無水乙醇60 mL充分溶解制備，2℃～8℃保存。

4）試劑四應用液配制：用時取0.15 mL 試劑四貯備液加水至25 mL 制備，現用現配。

5）試劑六：600 μg/mL Vc 標準品應用液配制：將 1 支標準品粉劑溶于10mL 試劑一應用液中制備；6 μg/mL VC標準品應用液配制：取600 g/mL VC標準品應用液再用試劑一應用液100倍稀釋備用，10分鐘內使用。

【注】：維生素C標準品易氧化，因此，最好在樣本上清液制備好后再配標準，并在10分鐘內進行檢測。

使用說明

1.儀器試劑準備

含536 nm波長的分光光度計、1 cm光徑比色皿（或酶標儀及96孔板）、37℃水浴鍋或恒溫箱、臺式低速離心機、各種規格移液器、雙蒸水、生理鹽水（0.9%）或PBS（0.1M）、渦旋混勻器、試管或離心管、蛋白測定試劑。

2.樣本前處理

1）血清/漿

直接使用。

2）組織

準確稱取待測組織的重量，按重量（g）:體積(mL)= 1:9 的比例加入9倍體積的勻漿介質（推薦0.1 mol/L且pH值為7.0-7.4 的磷酸鹽緩沖液或0.9%的生理鹽水），冰水浴條件機械勻漿，2500轉/分，離心10分鐘，取上清液（10%勻漿上清）待測，組織勻漿上清需測定其蛋白濃度。

3.上清液制備

取樣本(或組織勻漿上清)0.15 mL 加試劑一應用液0.45 mL，旋渦混勻，放置15分鐘后離心，3500～4000轉/分，離心10分鐘，上層清亮液體為上清液。組織樣本也可以直接用試劑一應用液作勻漿介質勻漿制備上清液，計算時參考組織計算第二條公式。

4.操作表

5.計算公式

1）液體樣本的計算：

VC含量(μg/mL) = (A測定-A空白)/(A標準-A空白) × C標準 × N

其中，C標準：表示標準品濃度，6 μg/mL；N：表示樣本測試前稀釋倍數(包括前處理稀釋倍數4)

2）組織的計算：

VC含量(μg/mgprot) = (A測定-A空白)/(A標準-A空白) × C標準 × N/Cpr

VC含量(μg/g組織) = (A測定-A空白)/(A標準-A空白) × C標準 × N1 × V樣總/W

其中，C標準：表示標準品濃度，6 μg/mL；N：表示樣本測試前稀釋倍數(包括前處理稀釋倍數4)；Cpr：表示組織勻漿蛋白濃度，mgprot/mL；N1：表示用試劑一應用液直接處理的樣本在測試前的稀釋倍數；W：表示樣本質量，g；V樣總：表示樣本用試劑一應用液直接勻漿時加入的試劑一應用液的總體積，mL。

2～8℃保存，有效期6個月。