「DIFF CRO」DIFF H5N1假病毒

假病毒（Pseudovirus）是指經過改造后的病毒顆粒。將病毒顆粒進行人工改造，保留其部分特性的同時，成為無致病性的假病毒顆粒。在病毒性傳染病防治過程中，通過小分子、中和抗體等抑制病毒入侵細胞是關鍵的一環，假病毒在這一過程的研究中具有獨特的優勢。

相對于“真”病毒，其安全性高，即使是高危病毒種對應的假病毒，也不需要在高生物安全等級（BSL 3/ BSL4）實驗室操作。「DIFF CRO」通過插入報告基因eGFP或Luciferase形成了H5N1高致病性禽流感的假病毒，增強了結果讀取的便捷性、客觀性，適合批量檢測。相對于ELISA等方法，假病毒更高的仿真度，可以更好地模擬感染的真實過程，增強結果可信性。

DIFF H5N1假病毒應用場景

‌DIFF H5N1假病毒為研究H5N1禽流感病毒提供了安全、高效的體外藥物篩選平臺，‌H5N1假病毒技術通過模擬病毒感染早期過程，安全性好，因此被廣泛應用于抗病毒藥物的篩選中。其表面蛋白構象結構與天然H5N1病毒相似，可以模擬病毒入侵和感染的機制。‌DIFF H5N1假病毒技術可針對H5N1血凝素（HA）和神經氨酸酶（NA）蛋白靶點進行藥物有效性評價。

另一方面，DIFF H5N1假病毒還可用于評價血清樣本中H5N1禽流感病毒活性的影響及其機制（圖1），為藥物在體外對H5N1禽流感病毒活性的評價提供了新的方法（圖2）。

圖1.DIFF H5N1假病毒中和實驗結果示例

圖2.DIFF H5N1假病毒中和實驗抑制率曲線示例

對每孔計數后可計算感染抑制率，根據抑制率可作圖如下，得知1/10 陽性血

清的NT50 為1/229，故該陽性血清的NT50 為1/2290。

此外，假病毒作為ELISA試劑盒原料通常用于研究抗體反應、疫苗效果評估等。DIFF H5N1假病毒可以作為ELISA（酶聯免疫吸附試驗）試劑盒的原料，假病毒中保留的表面蛋白HA蛋白可以作為檢測抗原，用于ELISA中進行定量分析。DIFF假病毒具備良好的安全性、穩定性和抗原表達能力，適合用于檢測工具中。

DIFF H5N1假病毒產品及服務信息

「DIFF CRO」可利用DIFF H5N1假病毒提供基于熒光斑點計數法的中和抗體檢測服務，服務流程（圖3）如下：

圖3. 中和抗體檢測流程圖

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DIFF H5N1假病毒產品庫：

「DIFF CRO」構建的DIFF H5N1假病毒基于2024最新從德克薩斯州農場工人（A/Texas/37/2024）中分離出的甲型H5N1病毒，病毒HA被鑒定為分支2.3.4.4b A（H5），根據最新的研究，該病毒序列中暫時沒有發現與流感抗病毒耐藥性相關的標志物。

服務內容

假病毒穩定性驗證

DIFF H5N1假病毒穩定性優異，穩定性驗證實驗（圖4）如下：選擇雞陽性血清進行4次重復，陰性血清進行2次重復，位于兩塊96板上，實驗每孔讀取結果和計數結果如下：

圖4、5. 穩定性驗證（板1：B/C列為陽性血清1；D/E列為陽性血清2；F/G列為陰性血清1；板2：B/C列為陽性血清3；D/E列為陽性血清4；F/G列為陰性血清2）

圖5. 4個陽性血清樣本中和實驗抑制率曲線

結果可知，陰性血清對H5N1假病毒無中和效果，陽性血清若用Reed Muench法計算則四個重復NT₅₀皆為1/933，陽性血清若用熒光斑點計數法得到NT₅₀如上圖（圖5）。