HB101感受態細胞

保存條件：-80℃。

1.產品簡介：

本產品是采用大腸桿菌HB101菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞，可有效抑制長片段末端重復區的重組，可用來制作 DNA 文庫或重組質粒的亞克隆。

基因型：F- mcrB mrrhsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR)glnV44λ-

特點：1. HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的雜合產物（同時也是Stbl3的原始菌株）。2. recA13 突變可有效抑制長片段末端重復區的重組，降低錯誤重組的概率。3. 不含核酸酶 endA1 突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液。4. hsdS20 背景使 HB101 缺失內切酶系統，增強了外源 DNA 的穩定性和提取質量。具鏈霉素抗性，不可用于藍、白斑篩選。pUC19 質粒檢測，轉化效率可達108 cfu/μlDNA。

2. 使用說明：

1．取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。

2．待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30min。

3．42℃熱擊45sec，然后快速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3min，該過程不要搖動離心管。

4．每個離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床， 150 rpm振蕩培養45～60min使菌體復蘇。

5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養， 37℃培養12~16h。

3.注意事項：

1．感受態細胞處于冰水混合狀態時立即插入冰上。

2．混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3．轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

*本試劑僅供實驗室研究使用