產品內容： 
提取液：60mL×1 瓶， 4℃保存； 
試劑一：液體 5 mL×1 瓶， 4℃保存； 
試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存，用時加入 1.3 mL 雙蒸水充分溶解備用，現配現用； 
試劑三：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存； 
試劑四：液體 20 mL×1 瓶，4℃保存
產品簡介：?
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與 乳酸之間的可逆反應，伴隨著 NAD+ /NADH 之間互變。 LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與 2, 4 - 二**苯肼作用生成丙酮酸二**苯腙，在堿 性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。 
試驗中所需的儀器和試劑：可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和 蒸餾水。 
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操作步驟：?
一、樣品測定的準備： 
1. 細菌或培養細胞：
收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清，按照細菌或細胞數量（10 4個）：提取液體積 （mL）為 500-1000:1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴， 功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 
2. 組織：
按照組織質量（g）：提取液體積（mL）為 1:5-10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）， 進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 
3. 血清（漿）樣品：直接檢測。 
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二、測定操作： 
1. 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 450nm，蒸餾水調零。 
2. 樣本測定（在 EP 管中加入下列試劑）
試劑名稱(μL)
測定管
對照管
樣本
10
10
試劑一
50
50
試劑二
10
?
蒸餾水
?
10
充分混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 15min
試劑三
50
50
充分混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 15min
試劑四
150
150
充分混勻，室溫靜置 3min，450 nm 下測定吸光度，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管需要設一個對 照管。
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?LDH 活力單位計算：?
A、用微量石英比色皿測定的計算公式如下：?
1. 標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.725x (x 為標準品濃度，μmol/mL；y 為對吸光度)。 2. 血清（漿）LDH 活力的計算 
單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
?LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×10 3=92×ΔA 
3. 細胞、細菌和組織中 LDH 活力的計算 
（1） 按樣本蛋白濃度計算： 
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1 nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。 LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10 3 =92×ΔA÷Cpr 需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。 
（2） 按樣本鮮重計算： 
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。 
LDH（U/g 鮮重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10 3 =92×ΔA÷W 
（3） 按細菌或細胞密度計算： 
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。 LDH（U/10 4 cell）= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10 3 =0.184×ΔA÷W V1：加入反應體系中樣本的體積，0.01 mL；V2：加入提取液的體積，1 mL； T：反應時間，15 min；Cpr： 蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g; 500：細胞或細菌總數，500 萬。10 3：1μmol/mL=10 3nmol/mL。 
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B、 用 96 孔板測定的計算公式如下： 
1、 標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.3625x (x 為標準品濃度，μmol/mL；y 為對吸光度)。 2、血清（漿）LDH 活力的計算 
單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。 
LDH（U/mL）=ΔA÷0.3625÷T×10 3=184×ΔA 
2、 細胞、細菌和組織中 LDH 活力的計算 
（1）按樣本蛋白濃度計算： 
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1 nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。 LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.3625×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10 3 =184×ΔA÷Cpr 需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質含量測定試劑盒。 
（2）按樣本鮮重計算： 
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。 
LDH（U/g 鮮重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10 3 =184×ΔA÷W 
（3）按細菌或細胞密度計算： 
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。 LDH（U/10 4 cell）= [ΔA÷0.3625×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10 3 =0.368×ΔA÷W V1：加入反應體系中樣本的體積，0.01 mL；V2：加入提取液的體積，1 mL； T：反應時間，15 min；Cpr： 蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g; 500：細胞或細菌總數，500 萬。10 3：1μmol/mL=10 3nmol/mL。
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相關文獻：
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