一、免疫熒光單標染色詳情介紹： 免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由于抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體（或抗原）上，與其相應的抗原（或抗體）結合后，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。 二、實驗流程： 1. 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-無水乙醇Ⅰ5min- 無水乙醇Ⅱ5min-75%酒精 5min，自來水洗； 2. 抗原修復：組織切片置于盛滿檸檬酸（PH6.0)抗原修復液的高壓鍋內進行抗原修 復，噴氣計時 2.5min， 自然冷卻后將玻片置于 PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃 動洗滌 3 次，每次 5min； 3. BSA 或者血清封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內滴 加用5%BSA，室溫封閉 1h； 4. 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內4°C 孵育過夜（濕盒內加少量水防止抗體蒸發）； 5. 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次8min。切片稍甩 干后在圈內滴加與種屬對應的二抗，覆蓋組織，室溫孵育 120min。之后玻片置于 PBS （PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌 3 次，每次 8min； 6. DAPI 染核：滴加DAPI，室溫孵育10min，之后玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上 晃動洗滌 3 次，每次 6min； 7. 封片：抗熒光淬滅劑封片； 8. 鏡檢拍照：切片于熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（DAPI 紫外激發波長330-380nm，發射波 長420nm，發藍光；FITC激發波長465-495nm，發射波長515-555 nm，發綠光；CY3激發波長 510-560，發射波長590nm，發紅光）。 三、染色結果判讀：DAPI染出來的細胞核在紫外的激發下為藍色，陽性表達為相應熒光素標記的紅光或者綠光