小鼠抗體效價ELISA檢測試劑盒

【間接法酶聯免疫法】

產品貨號：FRD90100K7

（實驗前請仔細閱讀產品說明書）

聲明：尊敬的客戶，感謝您選用本公司的產品。本試劑盒僅供體外研究使用、不用于臨床診斷!本試劑盒不含任何具有生物危害成分，但是試劑盒使用涉及的檢測樣本請在具有相應生物安全防護實驗室進行，由此可能造成的所有生物安全危害由使用者自行負責。

本產品適用于體外檢測小鼠血清、血漿或其它相關生物液體中鼠源抗體的效價水平。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分！如有疑問，請及時聯系我們。

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試劑盒組成：

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特別說明：

1.打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全完整。

2.一周內使用可存于4℃，需長時間保存或多次使用請按保存條件存放。

3.有效期6個月。

檢測原理:本試劑盒是采用間接酶聯免疫方法檢測小鼠血清、血漿或其它相關生物液體中鼠源抗體的效價水平,檢測時,先將抗原包被在酶標板微孔板上,洗去游離抗原.加入封閉液封閉未結合的微孔,加入稀釋好小鼠血清，加入HRP羊抗小鼠IgG，最后加入單組份TMB底物液。 TMB底物液在HRP催化下顯色，加入終止液終止顯色后，在酶標儀OD450/OD630讀取吸光值，吸光值大小與待檢測小鼠IgG濃度呈正相關，根據吸光值，可判斷出待檢樣品中小鼠抗體效價水平。

試驗所需自備物品:

1.酶標儀(450nm波長濾光片)

2.高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3.37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水

4.吸水紙

檢測前準備工作:

1.請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

2.洗滌液配制：將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正?，F象，可用40℃水浴微加熱使結晶完全溶解后再配制洗滌液（加熱溫度不要超過50℃，使用時洗滌液應為室溫）。當日使用 。

3.?HRP羊抗小鼠IgG工作液：實驗前計算當次實驗所需用量（以100μL/孔計），用通用稀釋液稀釋實際配制時應多配制100-200μL。

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洗滌方法: ???????????????

1.自動洗板機：每孔加入洗滌液350μL，注入與吸出間隔60秒。

2.手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μL，浸泡1-2分鐘，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體，在厚的吸水紙上拍干。

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操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫；試劑或樣品配制時，均需充分混勻，并盡量避免起泡。

1.包被：將抗原用包被液按照適宜濃度稀釋(建議1ug/ml)，每孔100μL，給酶標板覆膜，4℃過夜孵育。

2.封閉：棄去孔內液體，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分鐘，大約 350μL /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。立即每孔加入150ul封閉液，給酶標板覆膜，37℃孵育 60分鐘。

3.一抗孵育：棄去孔內液體，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分鐘，大約 350μL /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。加入事先梯度稀釋好的小鼠抗體，100ul/孔，給酶標板覆膜，37℃孵育 60分鐘。

4.二抗孵育：棄去孔內液體，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分鐘，大約 350μL /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。 立即每孔加入配好的HRP羊抗小鼠IgG工作液100μL（在使用前15 分鐘內配制），注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜，37℃孵育 60分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新配制的二抗。

4.?棄去孔內液體，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分鐘，大約 350μL /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內液體拍干。每孔加TMB底物溶液100μL，酶標板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分鐘左右（根據實際顯**況酌情縮短或延長，但不可超過 30 分鐘。當標準孔出現明顯梯度時，即可終止）。

5.每孔加終止液 100μL，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。?

6.立即用酶標儀在 450nm 波長測量各孔的光密度（OD值）。應提前打開酶標儀電源，預熱儀器，設置好檢測程序。

7.實驗完畢后將未用完的試劑按規定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結束。

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注意事項：

1.保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發和微生物的污染，否則可能會出現錯誤的結果。

2.酶標板：剛開啟的酶標板孔中可能會有少許水樣物質，此為正?，F象，不會對實驗結果造成任何影響。暫時不用的板條應拆卸后放入備用鋁箔袋，按推薦溫度存放！

3.加樣：加樣或加試劑時，第一個孔與最后一個孔的加樣時間間隔如果太大，將會導致不同的“預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。每次的加樣時間最好控制在10分鐘內。推薦設置復孔。

4.溫育：為防止樣品蒸發，實驗時必須給酶標板覆膜；洗板后應盡快進行下步操作，避免酶標板處于干燥狀態；嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。

5.洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在吸水紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水。在讀數前要注意清除底部殘留的液體和手指印，以免影響酶標儀讀數。

6.顯色時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如每隔5分鐘），如梯度已很明顯，請提前加入終止液終止反應，避免顏色過深影響酶標儀讀數。

7.底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。

8.混勻：充分輕微混勻對反應結果尤為重要，最好使用微量振蕩器(使用最低頻率)，如無微量振蕩器，可在反應前手工輕輕敲擊酶標板框混勻。

9.安全：試驗中請穿著實驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液樣品時，請按國家生物試驗室安全防護條例執行。

10.不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應終止液除外）

11.<, /span>試驗中所用的EP管和吸頭均為一次性使用，嚴禁混用，否則將影響試驗結果！

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? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ??*本試劑僅供實驗室研究使用