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GMCK^TMCell counting kit-8(CCK-8 Kit)

產品簡介：

CCK-8 kit是含有WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）化合物，用于細胞增殖檢測的一類檢測試劑盒。它的作用原理類似于MTT，在電子耦合試劑作用下被細胞線粒體中的一些脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲臜（Formazan）。細胞增殖越快，生成的Formazan越多，則顏色就越深。用酶標儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。CCK-8 Kit方法已被廣泛應用于一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤藥物篩選和細胞增殖試驗等。

??? 產品特點：

1．? 與MTT法和XTT法相比線性范圍廣，靈敏度高；

2．? 使用方法簡單方便，即開即用；

3．? 試劑穩定性強，重復性好，適合批量樣品檢測；

4．? 毒性低，細胞形態不發生改變；

5．? 酚紅和血清對其無明顯影響。

產品包裝：

保存條件：

避光-20℃保存，兩年有效；-4℃保存，一年有效。

實驗步驟：

細胞活性檢測

1.?????? 在96孔板中加入100μl細胞懸液，將培養板放入細胞培養箱中培養（在37℃，5%CO₂的條件下）。

2.?????? 向每孔中加入10μl CCK-8溶液（比例是10:1），同時設置空白對照孔。（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）

3.?????? 放入細胞培養箱中培養0.5-4h，孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度而定，可以設計時間梯度，選擇適宜的孵育時間。

4.?????? 用酶標儀在450nm波長處測定光吸收值。

5.?????? 如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。

細胞增殖-毒性檢測

1．?? 在96孔板中加入100μl的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時（在37℃，5% CO2的條件下）。

2．?? 向培養板加入10μl不同濃度的待測物質。

3．?? 將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24或48小時）。

4．?? 每孔加入10μl CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。

5．?? 將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

6．?? 用酶標儀在450nm波長處測定光吸收值。

7．?? 如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。

注意事項：

1.?????? 初次實驗前，應對接種細胞數量和孵育時間進行摸索，找出最佳細胞數量和孵育時間。

2.?????? 細胞接種均勻，培養板邊孔的水分容易蒸發，因此只加PBS或培養基，以減少實驗誤差。

3.?????? 檢測主要依賴脫氫酶催化反應，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，可在加CCK之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

4.?????? 如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測靈敏度最高。