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Invitrogen?TRIZOL說明書/價格（貨號：15596026）

產(chǎn)品名稱：Invitrogen?TRIZOL、Trizol?Reagent、一步法總RNA提取試劑

品牌：Invitrogen?

貨號：15596026?（100ML）和15596018（200ML）

產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)：可快速簡單地獲得高純度總RNA

效期：4度保存可2年

用途：TRIZOL試劑純化的RNA可用于PCR、RNA印跡分析、poly（A）+篩選或斑點(diǎn)雜交。純化的DNA和蛋白質(zhì)分別適用于DNA和蛋白質(zhì)印跡分析。

Invitrogen?TRIZOL說明書：

從細(xì)胞中提取總RNA?

1）?培養(yǎng)貼壁細(xì)胞：不須消化，可直接用Trizol進(jìn)行消化、裂解，Trizol體積按10cm2/ml比例加入。?

2）?懸浮細(xì)胞可直接收集、裂解，每1ml?Trizol可裂解5×106動物、植物或酵母細(xì)胞，或107細(xì)菌細(xì)胞。

從組織中提取總RNA?

1）液氮研磨，組織塊直接放入研體中，加入少量液氮，迅速研磨，待組織變軟，再加少量液氮，?

再研磨，如此三次，按50-100mg組織/mlTrizol加入Trizol，轉(zhuǎn)移入離心管進(jìn)行第2步操作。?

2）?勻漿：組織樣品按50-100mg/mlTrizol?加入Trizol，另外，組織體積不能超過Trizol體積?

的10%，否則勻漿效果會不好，用電動勻漿器充分勻漿約需1-2分鐘。?

2．細(xì)胞或組織加Trizol后，室溫放置5min，使其充分裂解。注：此時可放入-70℃長期保持。?

3．12000rpm?離心5min，棄沉淀。?

4．按200ul氯仿/ml?Trizol加入氯仿，振蕩混勻15分鐘，室溫放置15min。注：禁用漩渦振蕩器，?

以免基因組DNA斷裂。?

5．4℃12000g離心15min。?

6．吸取上層水相，至另一離心管中。?

注：1）千萬不要吸取中間界面。?

2）若同時提取DNA和蛋白質(zhì)，則保留下層酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，則棄下層酚相。?

7．按0.5ml異丙醇/ml?Trizol?加入異丙醇混勻，室溫放置5-10min。?

8．4℃?12000g離心10min，棄上清，RNA沉于管底。?

9．按1ml?75%乙醇/ml?Trizol加入75%乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。?

10．4℃?8000g離心5min，盡量棄上清。?

11．室溫晾干或真空干燥5-10min。?注：RNA樣品不要過于干燥，否則很難溶解。?

12．可用50ul?H2O，TE?buffer或0.5%SDS溶解RNA樣品，55-60℃5-10min。?

注：H2O、TE或0.5%SDS均須用DEPC處理并高壓。?

12、測O.D值定量DNA濃度。?

注：1）此方法提取RNA?A260/A280值在1.6-1.8之間。?

2）?產(chǎn)率估計：組織標(biāo)本：（ug?RNA/mg組織）1-10ug，培養(yǎng)細(xì)胞（ug?RNA/106?Cell）：5-15ug。?

注：1、組織或細(xì)胞量過少，可酌情減少Trizol用量。?

2、組織或細(xì)胞用量過多，會引起DNA對RNA的污染。?

3、高蛋白，脂肪或多糖類組織，肌肉組織或塊狀植物組織等，組織勻漿或液氮研磨?

后須4℃?1200離心10min去掉不溶物，再進(jìn)行下面操作，若頂層有脂肪物，則?

也須去掉。?

4、熱天提RNA，帶手套是必須的，手是RNase的主要來源。?

5、組織塊用液氮研磨，效果最好，若沒有液氮或電動勻漿器，可用手動勻漿器代替，?

此時組織塊不宜過大，且需先用眼科剪將組織絞碎，然后再充分研磨。