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簡介
- 關注腫瘤的發生、進展,并篩選相關的診斷和治療分子靶標是腫瘤基礎研究中的重要命題,常規的研究策略起始于一定樣本數的差異表達譜分析(基因芯片),從腫瘤與對照癌旁或正常組織之間基因表達的差異,尋找腫瘤發生的分子因素,并確定候選靶標。
- 一般而言,基因表達譜分析獲得的數據量極為龐大,差異基因數以千計,無法一一驗證,隨著分子生物學技術的進展,尤其是RNAi文庫以及高內涵篩選(High content screening,HCS)技術的應用,高通量地一次驗證成千上萬個基因的表型成為了可能。在基因芯片篩選獲得差異表達的候選分子后,制備在腫瘤中特異性高表達基因的RNAi慢病毒載體,并在細胞水平平行沉默候選靶基因,通過細胞生長、克隆形成、遷移運動能力等表型篩選,確認對腫瘤的典型生物學特征具有貢獻的功能分子,從而確定未來的應用型靶標分子。
- 一個靶標,即構成了一個富有研究價值的課題資源,在大規模的臨床樣本中,回顧性驗證靶標分子與臨床病理的相關性,同時深入探討其作用的分子機制,能夠具有縱深地開展與腫瘤發生、進展分子基礎相關的研究工作,獲得富有價值的科研成果。
技術特點
A.?從新鮮的臨床組織樣本分析正常與病理狀態之間基因表達的差異
分類清晰,帶有明確臨床問題的新鮮組織樣本,抽提RNA后進行表達譜芯片檢測,結合強大的生物信息學分析,能夠獲得正常與病理狀態之間差異表達基因的信息,篩選與疾病發生、進展相關的功能分子,確定治療靶標的候選范圍。
B.?利用RNAi文庫資源對腫瘤的癌基因進行Loss-of-function研究
吉凱基因擁有全基因組的RNAi慢病毒文庫,針對芯片篩選獲得的差異表達分子,從文庫中選取相應的靶向shRNA慢病毒感染細胞,能夠穩定、高效地沉默靶標基因,驗證其功能表型改變,解析其在腫瘤發生、發展過程中的作用。
C.?通過高內涵篩選(High content screening,HCS)技術高通量進行功能鑒定
高內涵篩選技術在細胞學水平對大量的差異表達分子,采用高速采集數據,全自動分析的方式,驗證出行使特定細胞學功能(包括增殖、凋亡、侵襲轉移等)的基因,由此在差異表達的基礎上,篩選出對腫瘤發生、發展具有重要功能的靶標分子。
D.?在大規模的腫瘤樣本中分析目的基因及相關分子的臨床相關性
大樣本的回顧性研究能夠在組織樣本中找到目的基因表達相關性的臨床證據,從病理和隨訪資料中,獲得靶標分子的表達陽性率與臨床的相關性,從而明確其應用價值。
服務流程
A.?新鮮組織樣本的RNA抽提,基因芯片檢測
B.?生物信息學分析,文獻檢索,確定候選研究分子
C.?從RNAi文庫中調取候選研究分子的shRNA慢病毒工具
D.?慢病毒感染細胞,在Cellomics系統上高通量驗證候選分子的功能表型
E.?在大規模臨床樣本中檢測靶標分子的表達,明確其臨床意義。
應用領域
A.?腫瘤功能基因研究
B.?特定疾病模型的功能分子篩選
C.?臨床導向的診斷、治療分子靶標篩選?
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樣本要求
高質量,具有明確病理和隨訪資料的腫瘤組織樣本對基因表達分析和候選靶標分子的驗證有重要作用。
相關服務
A.多種同類功能實驗對靶標基因的驗證
B.?靶標基因在多細胞的平行功能驗證
C.?過表達目的基因的反向功能驗證
D. RNAi的回復功能實驗
E.?體內試驗的驗證(動物模型)
F.?相關下游基因的表達檢測
G.?其他分子機制研究(如Y2H,信號通路熒光素酶報告系統)
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