?【產品介紹】?以特定酶自組織塊分離出原代間充質干細胞是常見的細胞培養技術。ACF高效原代間充質干細胞分離液利用數種重組表達的消化酶制備而成，無動物源成分。ACF高效原代間充質干細胞分離液針對組織的細胞外基質而設計, 不含胰酶，不會傷害細胞?？梢杂行У叵毎饣|，進而從組織塊 (臍帶、脂肪、胎盤) 分離出大量的原代間充質干細胞，作為后續細胞增殖使用。

?

【預期用途】使用AF高效原代干細胞分離液由組織塊(臍帶、脂肪、胎盤)分離出間充質干細胞，提供后續培養增殖。

【主要組成成分】由數種重組表達、無物動源的酵素和培養基組合而成。

【適應范圍】收獲目標組織(臍帶、脂肪、胎盤)的原代干細胞,以做細胞體外增殖培養。

?

?

【使用方法】（以臍帶組織為例）

1. 將臍帶用DPBS (BI, Cat#02-023-1A) 漂洗干凈，剪成1-50px大小，剔除血管。

2. 將組織塊剪成3-5mm3，移入50ml離心管，再加入適量的分離液。

* 一條長度10公分的臍帶建議加入10ml的分離液；或者組織塊 : 分離液（vol）= 1:1。

** 視情況而定，可自行在分離液中添加1%青鏈雙抗(BI, Cat# 03-031-1B) 。

3. 把50ml離心管橫放在37度細胞培養箱，過夜反應（16小時）。

* 若總反應體積較大，也可持續旋轉混合。

4. 加入和分離液等體積的0.05%EDTA（BI, Cat# 03-015-1B）終止反應后，1500 xg離心5分鐘，去除上清。

* 溶液比較濃稠，小心不要影響下層的細胞; 建議留下5ml左右的溶液。

** 若是脂肪組織，沒有粘稠的情形，以常規的200-300 xg離心即可。

*** 沒有EDTA, 可使用無鈣鎂DPBS取代；此時建議后面步驟6多重復2-3次，以確實去除酵素。

5. 以和分離液等體積的無鈣鎂DPBS重懸細胞后，500 xg離心5分鐘，去除上清。

6. 再次以和分離液等體積的無鈣鎂DPBS重懸細胞后，250 xg離心5分鐘，去除上清。

7. 用適量的培養基重懸細胞后，即可按常規細胞培養方法接種P0代細胞培養。

* 消化后的原代細胞，建議培養時接種密度提高到10,000/cm2以上；傳代后即可按常規的接種密度培養 。

?

?

【使用方法】（以皮下脂肪組織塊為例）

1.? ? 將新鮮的皮下脂肪組織塊以DPBS (BI, Cat# 02-023-1A) 漂洗干凈，剔除明顯的血管或血塊。

2. 組織塊剪成3-5mm3，移入50ml離心管，再加入適量的分離液。

* 1克組織塊加入約5ml分離液

** 視情況而定，可自行在分離液中添加1%青鏈雙抗(BI, Cat# 03-031)?

3. 把50ml離心管橫放在37度細胞培養箱，反應4小時 (用戶也可自行調整反應時間)。

? ? * 若總反應體積較大，也可使用旋轉混合儀器。

4. 加入和分離液等體積的0.05%EDTA（BI, Cat#03-015-1B）終止反應后，250 xg離心5分鐘，去除上清。

* 沒有EDTA, 也可使用無鈣鎂DPBS取代。

5. 以和分離液等體積的無鈣鎂DPBS重懸細胞后，250 xg離心5分鐘，去除上清。

6. 再次以和分離液等體積的無鈣鎂DPBS重懸細胞后，250 xg離心5分鐘，去除上清。

7. 用適量的培養基重懸細胞，再以100目的篩網過濾細胞液后，即可按常規細胞培養方法接種細胞培養。

* 消化后的原代細胞，建議培養時接種密度提高到10,000/cm2以上；傳代后即可按常規的接種密度培養。

?

資料下載：AF高效原代干細胞分離液說明書