操作簡單：可一步實現DNA的片段化和接頭連接，僅需9 h即可實現從細胞到二代測序文庫的轉化

超高活性：兼具Protein A&Tn5活性，DN**段化活性極高

細胞起始量低：可兼容低至60個細胞，甚至單細胞

純度高：蛋白純度高、核酸殘留低

1. CUT&Tag技術原理及應用

CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是替換傳統的ChIP-Seq用以研究蛋白質-基因組互作的新技術，與后者相比，它具有顯著優勢，如：信噪比高，可重復性好，實驗周期短（1天實現從細胞到文庫構建），細胞投入量低等，尤其適用于早期胚胎發育、干細胞、腫瘤以及表觀遺傳學等研究領域。

CUT&Tag技術的實驗流程簡單，主要包括：①收集細胞；②分別孵育一抗和二抗；③孵育pA/pG-Tn5轉座子（Hyperactive??pA/pG-Tn5 Transposon）；④激活轉座子，進行DN**段化；⑤DNA提?。虎尬膸鞌U增與純化。

2. 轉座子活性高

A：基因組DNA打斷效果

如圖所示，分別使用Vazyme #TD902中提供的pA-Tn5轉座子與市售轉座子（來自N公司）進行活性檢測；投入50 ng人基因組DNA，各取1 μl轉座子進行DN**段化（10 min），可以看出，Vazyme #TD902中的pA-Tn5融合酶切割DNA活性很高，文庫產量顯著高于N公司。

B：活細胞CUT&Tag實驗?

如圖B所示，投入10,000個HEK293細胞，分別使用Vazyme #TD902中提供的pA-Tn5轉座子與市售轉座子（來自N公司），按照各自說明書推薦的反應體系進行CUT&Tag實驗；其中，pA-Tn5轉座子使用的終濃度為0.04 μM，N公司轉座子按照1:100進行稀釋，一抗為H3K27me3（CST，#9733），二抗為Goat anti Rabbit（Bioworld，#BS13271）。通過使用Agilent 2100 Bioanalyzer進行文庫分布檢測，結果顯示，Vazyme的pA-Tn5轉座子切割活性明顯高于N公司，可構建出與文獻報道類似Ladder狀CUT&Tag文庫。

C： Peak 富集

如圖C所示：將圖B中的CUT&Tag文庫進行二代測序分析，可以看出，使用Vazyme #TD902獲得的文庫信噪比顯著高于N公司的文庫。

3. 實驗重復性好

如上圖所示，投入不同起始量（1,000、10,000或100,000）的HEK293細胞，每種起始量做2個重復，按照Vazyme #TD902說明書推薦的反應體系進行CUT&Tag實驗；其中，pA-Tn5轉座子使用的終濃度為0.04 μM，一抗為H3K27me3（CST，#9733），二抗為Goat anti Rabbit（Bioworld，#BS13271），陰性對照為與一抗同源的IgG（CST，#2729）。對上述文庫樣本進行二代測序，針對富集的reads進行pearson相關性分析，可以看出，平行樣本之間的重復性較好。

Hyperactive??In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina是針對CUT&Tag技術定向開發的專用試劑盒。CUT&Tag技術是一種研究蛋白質-DNA互作的新方法，通過將Protein G或Protein A與經過工程學改造的超高活性Tn5轉座酶融合，形成兼具雙重活性的新型融合酶(Hyperactive??pG-Tn5/pA-Tn5 Transposase)，在抗體引導下精準靶向切割目的蛋白附近的DNA序列。與傳統的ChIP-Seq相比，該技術具有細胞投入量低、實驗周期短、信噪比高、可重復性好等優勢，尤其適用于早期胚胎發育、干細胞、腫瘤以及表觀遺傳學等研究領域。試劑盒中所有試劑都經過嚴格的質量控制和功能驗證，最大程度上保證了文庫構建的穩定性和重復性。