女人与狗锁死了视频大全|霍金死亡过程恐怖视频|无节社团简谱季免费观看|六间房直播大厅|中文字幕欧美另类精品|久久人人玩人妻潮喷内射人人|亚洲国产一区二区三区在线观看

操作簡單：可一步實(shí)現(xiàn)DNA的片段化和接頭連接，僅需9 h即可實(shí)現(xiàn)從細(xì)胞到二代測序文庫的轉(zhuǎn)化

超高活性：兼具Protein A&Tn5活性，DN**段化活性極高

細(xì)胞起始量低：可兼容低至60個(gè)細(xì)胞，甚至單細(xì)胞

純度高：蛋白純度高、核酸殘留低

1. CUT&Tag技術(shù)原理及應(yīng)用

CUT&Tag（Cleavage Under Targets and Tagmentation）是替換傳統(tǒng)的ChIP-Seq用以研究蛋白質(zhì)-基因組互作的新技術(shù)，與后者相比，它具有顯著優(yōu)勢，如：信噪比高，可重復(fù)性好，實(shí)驗(yàn)周期短（1天實(shí)現(xiàn)從細(xì)胞到文庫構(gòu)建），細(xì)胞投入量低等，尤其適用于早期胚胎發(fā)育、干細(xì)胞、腫瘤以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。

CUT&Tag技術(shù)的實(shí)驗(yàn)流程簡單，主要包括：①收集細(xì)胞；②分別孵育一抗和二抗；③孵育pA/pG-Tn5轉(zhuǎn)座子（Hyperactive??pA/pG-Tn5 Transposon）；④激活轉(zhuǎn)座子，進(jìn)行DN**段化；⑤DNA提取；⑥文庫擴(kuò)增與純化。

2. 轉(zhuǎn)座子活性高

A：基因組DNA打斷效果

如圖所示，分別使用Vazyme #TD902中提供的pA-Tn5轉(zhuǎn)座子與市售轉(zhuǎn)座子（來自N公司）進(jìn)行活性檢測；投入50 ng人基因組DNA，各取1 μl轉(zhuǎn)座子進(jìn)行DN**段化（10 min），可以看出，Vazyme #TD902中的pA-Tn5融合酶切割DNA活性很高，文庫產(chǎn)量顯著高于N公司。

B：活細(xì)胞CUT&Tag實(shí)驗(yàn)?

如圖B所示，投入10,000個(gè)HEK293細(xì)胞，分別使用Vazyme #TD902中提供的pA-Tn5轉(zhuǎn)座子與市售轉(zhuǎn)座子（來自N公司），按照各自說明書推薦的反應(yīng)體系進(jìn)行CUT&Tag實(shí)驗(yàn)；其中，pA-Tn5轉(zhuǎn)座子使用的終濃度為0.04 μM，N公司轉(zhuǎn)座子按照1:100進(jìn)行稀釋，一抗為H3K27me3（CST，#9733），二抗為Goat anti Rabbit（Bioworld，#BS13271）。通過使用Agilent 2100 Bioanalyzer進(jìn)行文庫分布檢測，結(jié)果顯示，Vazyme的pA-Tn5轉(zhuǎn)座子切割活性明顯高于N公司，可構(gòu)建出與文獻(xiàn)報(bào)道類似Ladder狀CUT&Tag文庫。

C： Peak 富集

如圖C所示：將圖B中的CUT&Tag文庫進(jìn)行二代測序分析，可以看出，使用Vazyme #TD902獲得的文庫信噪比顯著高于N公司的文庫。

3. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好

如上圖所示，投入不同起始量（1,000、10,000或100,000）的HEK293細(xì)胞，每種起始量做2個(gè)重復(fù)，按照Vazyme #TD902說明書推薦的反應(yīng)體系進(jìn)行CUT&Tag實(shí)驗(yàn)；其中，pA-Tn5轉(zhuǎn)座子使用的終濃度為0.04 μM，一抗為H3K27me3（CST，#9733），二抗為Goat anti Rabbit（Bioworld，#BS13271），陰性對照為與一抗同源的IgG（CST，#2729）。對上述文庫樣本進(jìn)行二代測序，針對富集的reads進(jìn)行pearson相關(guān)性分析，可以看出，平行樣本之間的重復(fù)性較好。

Hyperactive??In-Situ ChIP Library Prep Kit for Illumina是針對CUT&Tag技術(shù)定向開發(fā)的專用試劑盒。CUT&Tag技術(shù)是一種研究蛋白質(zhì)-DNA互作的新方法，通過將Protein G或Protein A與經(jīng)過工程學(xué)改造的超高活性Tn5轉(zhuǎn)座酶融合，形成兼具雙重活性的新型融合酶(Hyperactive??pG-Tn5/pA-Tn5 Transposase)，在抗體引導(dǎo)下精準(zhǔn)靶向切割目的蛋白附近的DNA序列。與傳統(tǒng)的ChIP-Seq相比，該技術(shù)具有細(xì)胞投入量低、實(shí)驗(yàn)周期短、信噪比高、可重復(fù)性好等優(yōu)勢，尤其適用于早期胚胎發(fā)育、干細(xì)胞、腫瘤以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。試劑盒中所有試劑都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，最大程度上保證了文庫構(gòu)建的穩(wěn)定性和重復(fù)性。