PhosphoWorks 熒光ATP檢測試劑盒是美國AAT Bioquest生產的用于檢測ATP的試劑盒，三磷酸腺苷（ATP）在細胞能量，代謝調節和細胞信號傳導中起著基本作用。它被稱為細胞內能量轉移的“貨幣分子單位”，以驅動活細胞中的許多過程和化學合成。 ATP也是細胞通訊的信號分子，在DNA和RNA合成中起重要作用。 AAT Bioquest提供了多種生物發光測定試劑盒，可通過重組螢火蟲熒光素酶（目錄號21610和21609）確定ATP的納摩爾（nM）范圍。這些試劑盒需要酶標儀，通常用于細胞活力或細胞毒性測定。 PhosphoWorks 熒光ATP分析試劑盒基于一系列ATP誘導的酶偶聯反應，產生過氧化氫，該過氧化氫用我們的Amplite Red底物通過分光光度法定量。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優質的PhosphoWorks 熒光ATP檢測試劑盒。

產品說明書

樣品實驗方案

簡要概述

1.準備ATP工作溶液（50 μL）
2.添加ATP標準液或測試樣品（50 μL）
3.在室溫下孵育10-30分鐘
4.監測Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的熒光增加

溶液配制

1.制備儲備溶液

所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。 避免重復凍融循環。
1.1Amplite 紅色底物儲備液（200X）：
將30 μL DMSO（組分E）加入小瓶Amplite Red Substrate（組分A）中，制成200X Amplite Red Substrate儲備液。

1.2ATP標準溶液（10mM）：
將0.5 mL的ddH2O加入到ATP標準溶液（組分D）的小瓶中，制成10 mM ATP標準溶液。

2.制備標準溶液

ATP標準

將10 μL的10 mM ATP標準溶液添加到990 μL 1X PBS緩沖液中，以生成100 μM ATP標準溶液（AS7）。 取100 μM ATP標準溶液（AS7）并進行1：3連續稀釋，以使用1X PBS緩沖液獲得系列稀釋的ATP標準溶液（AS6-AS1）。

3.制備工作溶液

3.1將5毫升測定緩沖液（組分C）添加到酶混合瓶（組分B）中，并充分混合。

3.2在Enzyme Mix瓶中加入25 μL 200X AmpliteTM Red Substrate儲備液，充分混合以制成APT工作溶液。

樣品示例及操作

表1.黑色96孔微孔板中ATP標準品和測試樣品的布局。 AS = ATP標準品（AS1-AS7，0.14至100 μM），BL =空白對照，TS =測試樣品。

表2.每個孔的試劑組成

1.根據表1和2中提供的布局，準備ATP標準品（AS），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 μL試劑，而不是50 μL。

2.將50 μL ATP工作溶液添加到ATP標準液，空白對照和測試樣品的每個孔中，以使ATP總測定體積為100 μL /孔。 對于384孔板，將25 μL ATP工作溶液添加到每個孔中，總體積為50 μL /孔。

3.避光保存，室溫下孵育反應10-30分鐘。

4.使用熒光酶標儀在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）處監視熒光增加。