服務(wù)流程
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服務(wù)說明
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流式細(xì)胞凋亡檢測
? ? ? ?吉凱基因可根據(jù)客戶選擇或細(xì)胞外源表達(dá)的熒光類型，相應(yīng)提供Annexin V單染或Annexin V & PI雙染凋亡檢測，滿足不同的實(shí)驗(yàn)需求。
技術(shù)原理
? ? ? ?正常細(xì)胞中，磷酯酰絲氨酸（PS)主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型細(xì)胞的PS都會外翻到細(xì)胞表面，暴露在細(xì)胞膜外側(cè)，這一變化早于細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DNA片斷化和細(xì)胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。Annexin V是一種Ca+依賴的磷脂結(jié)合蛋白，具有易于結(jié)合磷脂類的特性，對PS有高度的親和性，因此，Annexin V標(biāo)記上熒光素可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS，從而檢測處于早期凋亡的細(xì)胞。
PS 外翻不是早期凋亡細(xì)胞獨(dú)有，也發(fā)生在中、晚期凋亡和壞死細(xì)胞中。但早期凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜是完好的，而中、晚凋和壞死細(xì)胞的細(xì)胞膜完整性已經(jīng)喪失。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性的增加，PI 能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用，就可以將處于不同凋亡時期的細(xì)胞區(qū)分開來。
吉凱應(yīng)用實(shí)例
? ?用待研基因shRNA慢病毒感染A549細(xì)胞，5天后收集細(xì)胞，用APC標(biāo)記的Annexin Ⅴ染色，經(jīng)流式細(xì)胞儀（Millipore，Guava easyCyte HT）檢測，結(jié)果顯示，shRNA下調(diào)目的基因表達(dá)后，凋亡細(xì)胞顯著增多，表明待研基因與A549細(xì)胞凋亡顯著相關(guān)。
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流式細(xì)胞周期檢測
? ??通過流式細(xì)胞術(shù)檢測PI熒光強(qiáng)度直接反映細(xì)胞各時相的DNA分布狀態(tài)，從而計(jì)算出各時相的百分率。
技術(shù)原理
? ? ???細(xì)胞周期（cell cycle)：是指細(xì)胞從前一次分裂結(jié)束起到下一次分裂結(jié)束為止的活動過程，通常由G0/G1期、S期、G2/M期組成。G0/G1期：二倍體細(xì)胞的DNA含量(2N)。S期：DNA開始合成，這時細(xì)胞核內(nèi)DNA的含量介于G1期和G2期之間。G2/M期：DNA復(fù)制結(jié)束成為4倍體（4N)。
? ? ? ?碘化丙啶(Propidium, PI)為插入性核酸熒光染料，能選擇性的嵌入核酸DNA或RNA雙鏈螺旋的堿基之間，產(chǎn)生紅色熒光，并且熒光強(qiáng)度和所嵌入的核酸含量成正比。細(xì)胞周期檢測時，首先用RNA 酶將RNA消化排除影響，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測PI熒光強(qiáng)度直接反映細(xì)胞各時相的DNA分布狀態(tài)，從而計(jì)算出各時相的百分率。
吉凱應(yīng)用實(shí)例
? ? ? ?用待研基因shRNA慢病毒感染U-2OS細(xì)胞，5天后收集細(xì)胞，PI染色，經(jīng)流式細(xì)胞儀（Millipore，Guava easyCyte HT）檢測，結(jié)果顯示，shRNA下調(diào)目的基因表達(dá)后，G1期細(xì)胞減少(P<0.05)， G2期細(xì)胞增多(P<0.05)，表明待研基因與U-2OS細(xì)胞周期顯著相關(guān)。
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