武漢樞密腦科學技術有限公司
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一、慢病毒簡介
慢病毒載體是由HIV的基礎上改造而來,由于其結構和功能的特點已被廣泛應用于基因治療和細胞分子生物學研究領域。它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力,并可以將外源基因有效地整合到宿主基因組上實現長時間的穩定表達。在感染能力方面可以有效的感染神經元細胞,肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞,實現外源基因的過表達或內源基因的敲降低并且可以結合CRISPR/Cas9系統實現靶基因的敲除。因此慢病毒載體有著廣泛的應用前景。
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樞密科技慢病毒采用三質粒系統轉染293T細胞包裝慢病毒顆粒,將Gag/Pol和載體分開,并且使用VSV-G的膜蛋白,包裝出來的慢病毒宿主范圍廣,是基因轉導的理想工具。
二、慢病毒包裝流程
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 圖1.慢病毒制備流程
三、慢病毒構建穩定細胞系
? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?圖2.穩定細胞系篩選流程
四、慢病毒應用案例
1、慢病毒度感染不同類型的細胞系
? ? ? ? ? ?圖3.慢病毒可以高效的感染各類腫瘤細胞、干細胞、原代細胞、和不分裂的細胞
2、慢病毒度感染小鼠腦組織
慢病毒可以攜帶光感基因(ChR2、eNpHR3.0等)感染神經元細胞,實現靶基因的高效表達。
? ? ? 圖4. LV攜帶光敏基因的應用(Feng Zhang, Viviana Gradinaru., et al. Nature protocols,2010)
五、樞密優勢
樞密科技開發出一系列專有技術和試劑,從病毒滴度、純度、活性以及一致性等方面顯著提升了慢病毒包裝工藝水平。
