產品簡介

PEI 40000 是一種分子量為 40000 的高電荷陽離子聚合物，能夠結合帶負電荷的核酸分子，形成復合物， 并進入細胞中。PEI 40000 作為一種瞬時轉染試劑，細胞毒性低，轉染效率高。目前已經驗證線性 PEI 轉染試劑廣泛適用于多種細胞系包括 HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2 和 Hela 細胞等，轉染效率高達 80%~90%。

PEI 40000 與 PEI 25000 轉染試劑相比，優點主要體現在：

1. PEI 40000 較易溶解，可直接在水中溶解，而PEI 25000 需要先把水調成弱酸性助其溶解，溶解后再用 NaOH 把pH 調至中性；

2. PEI 40000 操作簡便， 更易于使用，且比 PEI 25000 的轉染效果好；

3. PEI 25000 含有 4-11%的丙?；鶜埩?，其能阻止聚合物主鏈與 DNA 結合。相較于 PEI 25000，PEI 40000 是完全脫落的結構，因此其性能始終保持高效。

本產品為速溶型，溶解迅速，配制方便。

產品信息

儲存條件

室溫密封保存，有效期2年。儲存液在 4 ºC 保存，有效期3個月。

注意事項

1.本品為鹽酸鹽形式的聚乙烯亞胺，具有易結塊傾向。

2.對大多數細胞來而言，每1 μg DNA 使用3.0 μL PEI 40000轉染試劑都能獲得較高轉染效率。

3.為了您的安全和健康，請穿好實驗服并戴一次性手套，在通風櫥中進行操作。

4.本產品僅用于科研。

使用說明

1. 儲存液配置（1 mg/mL）

1) 材料

PEI 40000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或類似的生物級水、1 mol/L 氫氧化鈉（NaOH）、一次性 0.1~0.2 μm PES 真空無菌過濾器、無菌 HDPE 或聚丙烯儲存瓶。

2) 配置儲存液（1 mg/mL）

a. 于1 L玻璃燒杯，將1 g PEI 40000粉末加入900 mL Milli-Q®超純水或其他相當級別的生物用水中， 在磁子攪拌器上攪拌均勻。

b. 待 PEI 40000完全溶解（通常不到5 min）。

c. 用氫氧化鈉(1 mol/L)溶液調節 pH 為6.80~6.90。

d. 將溶液轉入量筒內，并加水定容到1 L。

e. 用一次性0.1~0.2 µm PES真空過濾器過濾除菌，即得到1 mg/mL的儲存液。

f. 根據需要分裝并儲存在4 °C，3個月穩定。

2. 貼壁細胞轉染操作流程（以6孔板為例）

1) 接種細胞：為了提高轉染效率，建議在轉染前一天接種細胞，以轉染時細胞密度在70%~80%為宜。

2) 按照以下體系配制DNA-PEI核酸-轉染試劑復合物：

a. 對于每孔細胞，使用100 μL無血清培養基稀釋2 μg目的DNA，充分混勻成 DNA 稀釋液。

b. 立刻向 100 μL 的DNA 稀釋液中加入 4 μL 的 PEI 40000 轉染試劑，輕輕混勻。

c. 在室溫下孵育10~15 min，使得形成 DNA-PEI陽離子核酸轉染試劑復合物。

3) 轉染細胞：

a. 在形成復合物過程中，移除細胞生長培養基，每孔中加入2 mL新鮮預熱的完全培養基。

b. 直接將100 μL DNA-PEI核酸-PEI復合物加入細胞中，搖動培養板，輕輕混勻。

c. 37 ℃，5% CO₂培養箱培養，轉染后最快5 h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。

不同細胞培養容器轉染用量（僅供參考）：

【注】該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。

3. 懸浮細胞轉染操作流程（1L體系為例）

1) 接種細胞：根據細胞狀態，選擇合適的接種密度，建議細胞接種密度為 1-1.5×10⁶ cells/mL，使第二天轉染時細胞密度為 2-3×10⁶ cells/mL 為宜。

2) 準備 DNA-轉染試劑復合物：

a. 建議質粒（μg）與試劑（μL）參考配比區間為 1:0.5 - 1:3。

b. 質粒稀釋：使用50 mL無血清培養基稀釋2 mg質粒，并輕輕混勻。

c. 試劑稀釋：使用50 mL無血清培養基稀釋4 mL轉染試劑，并輕輕混勻。

d. 配置復合物：將配置好的轉染試劑稀釋液加入到質粒稀釋液中，輕輕渦旋混勻后，室溫靜置10-20 mins，備用。

3) 轉染細胞：

a. 直接將配置好的 DNA-轉染試劑復合物加入到1L細胞懸液中，搖動培養瓶，輕輕混勻。

b. 在 37℃，5% CO₂培養箱中培養24-72h后進行檢測分析。