基因組文庫（Genomic Library）構建
產品名稱： 基因組文庫（Genomic Library）構建
英文名稱： Western Biotechnology Inc
產品編號：
產品價格： 歡迎來電詳詢023-65316016，023—65316556
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品牌商標： null
更新時間： 2023-07-31T09:56:51
使用范圍： null
?基因組文庫（Genomic?Library）構建
簡介：
用限制性內切酶切割細胞的整個基因組DNA，可以得到大量的基因組DNA片段，然后將這些DNA片段與載體連接，再轉化到細菌中去，讓宿主菌長成克隆。這樣，一個克隆內的每個細胞的載體上都包含有特定的基因組DNA片段，整個克隆群體就包含基因組的全部基因片段總和稱為基因組文庫。基因文庫＝基因組文庫＋cDNA文庫?。??
載體的種類和特征：
|
? |
受體細胞 |
結構 |
插入片段 |
舉例 |
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質粒 |
E.coli |
環狀 |
很小，<8kb |
pUC18/19?,T-載體,? |
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λ噬菌體 |
E.coli |
線狀 |
9-24kb |
EMBL，λgt系列 |
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絲狀噬菌體及噬菌粒 |
E.coli |
環狀 |
<10kb |
M13系列 |
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粘粒載體 |
E.coli |
環狀 |
35-45kb |
? |
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BAC |
E.coli |
環狀 |
約300kb |
? |
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PAC |
E.coli |
環狀 |
100-800kb |
PCYPAC |
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YAC |
酵母細胞 |
線性染色體 |
100-2000kb |
? |
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MAC |
哺乳動物細胞 |
環狀 |
>1000kb |
? |
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病毒載體 |
動物細胞 |
環狀 |
? |
SV40?載體，昆蟲桿狀病毒載體 |
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穿梭載體 |
動物細胞和細菌 |
環狀 |
? |
pSVK3質粒，PBV,Ti質粒， |
基因組文庫構建步驟：
1、載體：?
l噬菌體：48.5kb,插入型(最多可容納9kb)、取代型(可容納?38-51kb，最適19-20kb)，?EMBL,?Charon?粘性質粒(Cosmid)：4-6kb,?質粒+噬菌體的性質，可容納大片段的外源基因，最多可容納46kb。?酵母人工染色體克隆體系（YAC，Yeast?Artificial?Chromosome??Cloning?System）?插入大小200—1000kb
2、?載體DNA的制備：?高分子量的外源DNA?100-150kb載體DNA酶切反應-----載體臂的純化-----載體脫磷處理?（常用BamHI）???（蔗糖密度梯度離心）??（堿性磷酸酶）?
3、連接和包裝：外源片段與兩臂之間的比例，包裝蛋白?4、感染宿主菌：選擇合適的宿主菌，LE392,?NM538,?NM539,?KW251等?
5、基因組文庫的保存和擴增：?
6、測滴度，要在106fu以上
7、保存：氯仿4℃，7%?DMSO?-70℃
您需要提供：?
動物的血或細胞、新鮮植物葉片、活體昆蟲或純化好的DNA樣品。
我們提供：
1、文庫（10%甘油菌）以及菌落效價（CFU/ml）；
2、隨機抽樣測序結果。
威斯騰實驗服務流程
威斯騰生物服務項目
| 分子生物學檢測 | 蛋白質與免疫學 | 動物實驗 |
| 實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
| ELISA（酶聯免疫吸附法）技術 | Western-blot?實驗服務 | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務 | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經損傷模型 |
| 染色質免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
| GST?pull?Down | ITRAQ定量蛋白質組學 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學 | 肺動脈高血壓動物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
| 過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
| 過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
| 腺相關病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細胞培養 | 肝纖維化模型 |
| 細胞因子芯片 | 骨髓間充質干細胞培養 | 膽結石模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 脂肪干細胞培養 | 急性胰腺炎模型 |
| 生長因子芯片 | 心肌成纖維細胞培養 | 急性腎衰竭模型 |
| 炎癥因子芯片 | 軟骨細胞培養 | 體內血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管內皮細胞培養 | 關節炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神經元細胞培養 | I型和II型糖尿病模型 |
| 趨化因子芯片 | 內皮組細胞原代培養 | 裸鼠成瘤 |
| HuProt?TM?20K人類蛋白組芯片 | 基因編輯動物 | |
| 電生理相關服務 | 動物整體實驗服務 | |
| 膜片鉗實驗 | ||
| 細胞生物學檢測 | 高通量測序 | 代謝組學 |
| 細胞原代培養 | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
| TUNEology 波長可調檢測卡盒-->
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