糖鏈抗原125（CA125）酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供體外研究使用

產品貨號：L5E1006??????????????????????????????????????????

預期應用

ELISA法定量測定人血清、血漿、細胞培養上清或其它相關生物液體中糖鏈抗原125（CA125）的濃度，適用于胰腺，肝膽和胃癌患者的早期診斷，治療的監測和監測癌癥的復發。

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概述

癌抗原125（CA125）：卵巢癌首選標志物，它對卵巢癌的陽性檢出率在70%-90%。另外它還是個廣譜腫瘤標志物，在胰腺癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、胃腸道惡性腫瘤、子宮癌等均可增高。某些良性疾病如女性盆腔炎、子宮內膜異位、卵巢囊腫、子宮肌瘤、慢性肝炎、胰腺炎、膽囊炎、肺炎等也會升高。故CAl25檢查對大部分患者而言不能作為直接診斷依據，但其濃度可用于療效觀察和判斷預后，CAl25水平下降表明預后良好；若腫瘤復發，CAl25的升高要早于其他臨床指征。

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實驗原理

用純化的CA125抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗CA125抗體的微孔中依次加入標本或標準品、HRP標記的抗CA125抗體，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的CA125含量呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

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試劑盒組成及試劑配制

1.???????? 酶聯板：一塊（96孔）

2.???????? 標準品：6瓶，0.5ml/瓶。CA125濃度分別為0 U/ml，10 U/ml，30 U/ml，150U/ml，300 U/ml，600 U/ml。

3.???????? HRP標記的抗CA125抗體：1×10ml/瓶。

4.???????? TMB顯色液：1×10ml/瓶。

5.???????? 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋20倍。

6.???????? 終止液：1×5ml/瓶（2N H₂SO4）。

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標本的采集及保存

1.???????? 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于5000 x g離心5分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

2.???????? 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 5000 x g離心5分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

3.???????? 細胞培養物上清或其它生物標本：請5000 x g離心5分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。

注：以上標本置4℃保存應小于1周，-20℃或-80℃均應密封保存，-20℃不應超過3個月，-80℃不應超過6個月；標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測；高血脂的標本不需進行特殊處理，可直接檢測。

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操作步驟

1.???????? 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓?/SPAN>加樣品稀釋液40ul，余孔分別加標準品或待測樣品40ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應45分鐘。

為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.???????? 棄去液體，洗滌五次，拍干。每孔加HRP標記的抗CA125抗體工作液100ul，37℃,45分鐘。

3.???????? 溫育后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，拍干。

4.???????? 每孔加顯色工作液100ul，37℃避光顯色，15分鐘。

5.???????? 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

6.???????? 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進行檢測。

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注：

1.???????? 每次實驗留一孔作為空白調零孔（不同于空白孔），該孔不加任何試劑，只是最后加底物溶液即顯色液及2N H₂SO4。測量時先用此孔調OD值至零。

2.???????? 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室 溫。使用后立即冷藏保存試劑。

3.???????? 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入HRP標記抗體溶液或底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜，洗板拍干后請立即加入后步試劑，應避免微孔干燥掉。

4.???????? 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

5.???????? 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

6.???????? 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。HRP標記抗體工作液、顯色液工作液請依據所需的量配置使用。標準品需要重復使用時，請按需要量分裝，于-20度冰箱保存。請勿重復使用HRP標記抗體工作液、顯色液工作液等。

7.???????? 建議檢測樣品時均設雙孔測定，以保證檢測結果的準確性。

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洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水

紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據需

要，重復此過程數次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

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特異性

?? ?本試劑盒可同時檢測重組或天然的糖鏈抗原125（CA125）。

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計算

??以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線（推薦使用專業制作曲線軟件進行分析，如curve expert 1.3），根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度，再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

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注意事項

1.???????? 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

2.???????? 一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用多道移液器加樣。

3.???????? 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。

4.???????? 如標本中待測物質含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請最后乘以稀釋倍數。

5.???????? 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。

6.???????? 底物請避光保存。

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檢測范圍：10U/ml –600U/ml

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最低檢測限：5.0U/ml

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說明

1.???????? 只有全部使用LINC-BIO試劑才能保證檢測效果，因為所有試劑都是有關聯的，不能混用其他制造商的產品。只有嚴格遵守LINC-BIO試劑的試驗說明才會得到最佳的檢測結果。

2.???????? 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現錯誤的結果。

3.???????? 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本/標準品，酶結合物或底物時，第一個孔與最后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且，洗滌不充分將影響試驗結果。

4.???????? 試劑盒保存：-20℃（較長時間不用時，僅適用于部分試劑，具體見標簽）；2-8℃（頻繁使用時）。

5.???????? 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。

6.???????? 剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正?，F象，不會對實驗結果造成任何影響。

7.???????? 所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

8.???????? 有效期：6個月。

特別說明:本試劑盒僅供科學研究用.